[發(fā)明專利]一種新的多肽——人Kazal型抑制因子15和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00115891.0
• 申請(qǐng)日: 2000-05-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1325887A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人Kazal型抑制因子15，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

Kazal型抑制因子家族為眾多絲氨酸蛋白酶抑制因子家族中的一個(gè)。該抑制因子家族的成員均含有如下所示的結(jié)構(gòu)特征：

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其中：

“C”：為保守的半胱氨酸殘基，涉及二硫鍵的形成。

“#”：為活性位點(diǎn)殘基。

“*”：為一致性序列片段所在的位置。

現(xiàn)人們已克隆得到了眾多該蛋白家族的成員，如胰腺胰蛋白酶抑制劑、哺乳動(dòng)物精子頂體抑制因子、鼠前列腺分泌糖蛋白、鳥(niǎo)類胰蛋白酶抑制劑及雞胰蛋白酶抑制劑等，均為該蛋白家族的成員。幾乎所有Kazal型抑制因子家族的成員均含有如下所示的一致性序列片段：

C-X(7)-C-X(6)-Y-X(3)-C-X(2,3)-C；

該序列片段由第二個(gè)半胱氨酸殘基開(kāi)始，由第五個(gè)半胱氨酸殘基結(jié)束。序列片段中的四個(gè)半胱氨酸殘基參與蛋白二硫鍵的形成。在抑制因子發(fā)揮正常生理學(xué)功能中起著重要的作用，該片段特殊位點(diǎn)的突變將導(dǎo)致蛋白的表達(dá)異常，從而影響各相關(guān)組織的正常生理功能。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長(zhǎng)因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長(zhǎng)因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長(zhǎng)因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人Kazal型抑制因子的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人Kazal型抑制因子15。

由于如上所述人Kazal型抑制因子15蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人Kazal型抑制因子15蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人Kazal型抑制因子15蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--人Kazal型抑制因子15以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人Kazal型抑制因子15的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人Kazal型抑制因子15的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人Kazal型抑制因子15的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽--人Kazal型抑制因子15的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽--人Kazal型抑制因子15的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人Kazal型抑制因子15異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；