[發(fā)明專利]一種新的多肽——分子伴侶cpn60蛋白15和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請?zhí)枺?/td>: 00115851.1
• 申請日: 2000-05-24
• 公開（公告）號: CN1324816A
• 公開（公告）日: 2001-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--分子伴侶cpn60蛋白15，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

近年來，人們對“分子伴侶”的研究比較活躍。伴侶蛋白在生物體內(nèi)參與蛋白折疊及寡聚蛋白復(fù)合物聚集、維持蛋白質(zhì)前體處于解折疊狀態(tài)以便于蛋白跨膜運(yùn)輸及使變性蛋白得以解聚和修復(fù)等多種重要的生物學(xué)過程。其主要是輔助其他多肽維持正常的構(gòu)象，以形成正確的寡聚結(jié)構(gòu)，從而發(fā)揮正常的生理學(xué)功能。它們分布非常廣泛，從細(xì)菌到人，動(dòng)物和植物，在原核生物、葉綠體及線粒體中均大量存在。該類蛋白在生物體內(nèi)的表達(dá)異常將導(dǎo)致一些蛋白正常構(gòu)象的形成，從而影響各種蛋白發(fā)揮正常的生理學(xué)功能及引發(fā)各種與物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)異常相關(guān)的疾病，如一些代謝紊亂癥、免疫紊亂癥等。

分子伴侶形成一寡聚復(fù)合物，其由兩個(gè)不同的亞單位組成：一個(gè)為60Kd的蛋白，如cpn60(在細(xì)菌中為groEL)；另一個(gè)為13Kd蛋白，如cpn10(在細(xì)菌中為groES)。它們均在生物體內(nèi)與一些蛋白相互作用，以調(diào)節(jié)各種蛋白在生物體內(nèi)的功能。

cpn60蛋白具有弱ATP酶活性，所有的伴侶蛋白的該亞單位均由高度保守的550-580個(gè)氨基酸殘基組成。cpn60蛋白均含有一由12個(gè)氨基酸殘基組成的保守的一致性序列片段，該片段如下所示：

A-[AS]-X-[DEQ]-E-X(4)-G-G-[GA]；

該序列片段是該亞單位與其他蛋白相互作用，協(xié)調(diào)分子伴侶發(fā)揮正常生理學(xué)功能重要部位。該片段同時(shí)是該亞單位發(fā)揮ATP酶活性的重要部位。該序列片段的突變將導(dǎo)致亞單位的功能異常，從而影響整個(gè)分子伴侶在生物體內(nèi)的功能。該蛋白在生物體內(nèi)還可結(jié)合其他相關(guān)蛋白發(fā)揮各種相似的蛋白調(diào)節(jié)作用。因而，其與生物體內(nèi)一些物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的疾病，如各種代謝紊亂癥、免疫系統(tǒng)紊亂癥等的發(fā)生密切相關(guān)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與分子伴侶cpn60蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為分子伴侶cpn60蛋白15。

由于如上所述分子伴侶cpn60蛋白15蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的分子伴侶cpn60蛋白15蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新分子伴侶cpn60蛋白15蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--分子伴侶cpn60蛋白15以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼分子伴侶cpn60蛋白15的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼分子伴侶cpn60蛋白15的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)分子伴侶cpn60蛋白15的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對本發(fā)明的多肽--分子伴侶cpn60蛋白15的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對本發(fā)明多肽--分子伴侶cpn60蛋白15的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與分子伴侶cpn60蛋白15異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。