[發明專利]一種新的多肽——鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請號: 00115764.7
• 申請日: 2000-05-19
• 公開（公告）號: CN1324944A
• 公開（公告）日: 2001-12-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/18;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/42;C12Q1/68;A61K38/46
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鈉泵(Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶)，位于所有動物細胞的質膜中(Horisberger?J.D.,Lemas?V.,Krahenbul?J.P.,Rossier?B.C.,Annu.Rev.Physiol.53:565-584(1991))，是一種催化亞基(alpha鏈)，一種約為34Kd(beta鏈)的糖蛋白亞基以及一種約為6Kd小的疏水蛋白的異源三聚體，它是主要的離子動勢腺苷三磷酸酶，它伴隨腺苷三磷酸分子中所含的自由能轉運Na⁺及K⁺穿過胞質膜。

Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶中的beta亞基是具有組織特異性的糖蛋白，它通過組裝alpha/beta異源二聚體，調控轉運至質膜的鈉泵數量(McDonough?A.A.,Gerring?K.,Farley?R.A.,FASEB?J.4:1598-1605(1990))。Beta亞基在結構上由約35各殘基的帶電荷胞質域構成，后接一個跨膜域，與一個含有三個二硫鍵及糖基化位點的大的胞外域。現已知beta亞基的兩種同種型：beta-1及beta-2，它們具有50％的序列同一性。胃(K⁺,H⁺)腺苷三磷酸酶(質子泵)與胃酸產生有關，它由兩個亞基構成，其beta鏈與鈉泵beta亞基高度同源。Beta亞基由兩個保守的特征序列模板：[FYW]-x(2)-[FYW]-x-[FYW]-[DN]-x(6)-[LIVM]-G-R-T-x(3)-W，位于胞質域，而第二個位于胞外域并含有參與形成二硫鍵的兩個半胱氨酸：[RK]-x(2)-C-[RKQWI]-x(5)-L-x(2)-C-[SA]-G。beta亞基還具有陽離子轉運能力以及烏本(箭毒)苷結合能力。

在許多可興奮細胞中，鈉通道是負責由最初動作電位去極化而增加初始的鈉通透性，這些可興奮細胞包括肌肉，神經，以及心臟細胞。心臟鈉通道尤其與刺激與傳導心肌細胞中的動作電位有關(Fozzard,H.A.,et?al.,Circ.Res.,56:475-485(1985))。Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶廣泛存在于所有的細胞中確保了對細胞容積的重要控制并維持了通過細胞膜的Na⁺,K⁺梯度。Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶在上皮細胞基底外側膜的不對稱分布使得鹽和水可自細胞層一側向量轉運(正如在腎及腸中所進行的)，從而控制胞外容積以及胞內胞外區室間的滲透平衡。在可興奮細胞中，Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶對于控制膜電位是至關重要的，因而與組織的可興奮性密切相關。

本發明的多肽與鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基家族成員具有相同的特征序列模板，并有相似的生物學功能，故而認為該蛋白是鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基家族的新成員。該多肽及其抑制劑，激動劑，拮抗劑可用與診斷，防治自身免疫性胃炎等疾病，還可作為抗心律不齊藥物以及強心劑。

由于如上所述鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--鈉與鉀腺苷三磷酸酶beta亞基10的抗體。