[發明專利]一種新的多肽——人蝶呤鉬氧化還原酶12和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請號: 00115762.0
• 申請日: 2000-05-19
• 公開（公告）號: CN1324932A
• 公開（公告）日: 2001-12-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人蝶呤鉬氧化還原酶12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鉬酶在原始細菌到高等植物和動物，包括人類中都有重要作用。

鉬酶中的鉬原子通過一個小分子與酶蛋白結合，這個小分子可以是一個鐵-鉬協同因子(iron-molybdenum?cofactor)或蝶呤-鉬協同因子(pterin-molybdenumcofactor)。除了一種把氮原子轉變成氨的固氮酶(nitrogenase)結合鐵-鉬協同因子外，其余的鉬酶都有蝶呤-鉬協同因子，這些鉬酶由于結構、生物學功能和酶特性上的相似，可以歸成-類，即蝶呤鉬氧化還原酶。

鉬酶催化氮、硫循環中的一些步驟，而遺傳上的鉬酶缺乏會導致嚴重的臨床異常。在動物體內，一種蝶呤鉬氧化還原酶，肺亞硫酸鹽氧化酶催化含硫化合物代謝的最后一步，即硫酸鹽的形成；而另一種黃嘌呤氧化酶則被懷疑與心臟病如心肌梗塞有關。

蝶呤鉬氧化還原酶大小從715個到1246個氨基酸殘基不等，有三個特征序列，第一個位于N-端的一個保守部位，包含兩個Cys殘基，其序列為：(STAN)-X-(CH)-X(2,3)-C-(STAG)-(GSTVMF)-X-C-X-(LIVMFYW)-X-(LIVMA)-X(3,4)-(DENQKHT)(X為任意氨基酸殘基)，兩個Cys殘基與結合蝶呤-鉬協同因子有關，而bisC、bisZ和torA無此序列。

第二個位于酶的中央部位，其序列為：(STA)-X-(STAC)(2)-X(2)-(STA)-D-(LIVMF)(2)-L-P-X-(STAC)(2)-X(2)-E,fdnG、fdoG、nasA、napA和narB無此序列。第三個序列為：A-X(3)-(GDT)-I-X-(DNQTK)-X-(DEA)-X-(LIVM)-X-(LIVMC)-X-(NS)-X(2)-(GS)-X(5)-A-X-(LIVM)-(ST),nasA、napA和narB無此序列。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人蝶呤鉬氧化還原酶11的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人蝶呤鉬氧化還原酶12。

由于如上所述人蝶呤鉬氧化還原酶12蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人蝶呤鉬氧化還原酶12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人蝶呤鉬氧化還原酶12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人蝶呤鉬氧化還原酶12以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蝶呤鉬氧化還原酶12的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蝶呤鉬氧化還原酶12的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人蝶呤鉬氧化還原酶12的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人蝶呤鉬氧化還原酶12的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人蝶呤鉬氧化還原酶12的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人蝶呤鉬氧化還原酶12異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。