[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白12和編碼這種多肽的多核苷酸

在審

• 申請號: 00115722.1
• 申請日: 2000-05-16
• 公開（公告）號: CN1323828A
• 公開（公告）日: 2001-11-28
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人鋅指蛋白12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

真核基因的轉錄調控對于基因的正常表達及發揮生物學功能是十分重要的，通常由轉錄調控因子來完成這一過程。轉錄調控因子在生物體內參與決定基因在何種組織及何種發育階段開始轉錄，編碼這類蛋白的基因如發生突變，不但該基因自身不能正常表達，而且受其調節的許多基因也不能正常的進行轉錄與表達。轉錄因子對基因表達的調控主要通過轉錄因子與特定的DNA序列結合、轉錄因子間的相互作用及轉錄因子與常規轉錄機構的相互作用在完成。根據結構基序的不同，已知的DNA結合蛋白可主要分為兩類：含有螺旋-轉角-螺旋基序的蛋白及鋅指蛋白[Kamal?Chowdhury,Heidi?Rohdewohld?et?al.,NucleicAcids?Research,1988,16:9995-10011]。

鋅指蛋白為編碼鋅離子介導的核苷酸結合蛋白多基因家族中的成員，鋅指蛋白按其結構特征又可分為各種不同的家族。人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種類型的鋅指蛋白。果蠅Kruppel基因類似的鋅指蛋白分布最為廣泛，且在生物體內有著重要的生物學功能。這些基因均含有鋅指蛋白的特征性連續重復的C2-H2鋅指蛋白結構域。研究發現，這些蛋白與基因的轉錄活化及抑制有關，這些蛋白的表達異常將引發各種發育紊亂性疾病、各種腫瘤的發生、各種遺傳性疾病及免疫系統疾病[Kamal?Chowdhury,HeidiRohdewohld?et?al.,Nucleic?Acids?Research,1988,16:9995-10011]。

所有的鋅指蛋白Kruppel家族的成員均含有28-30個氨基酸長的保守的指重復序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸殘基位點為高度保守的。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個拷貝，其拷貝數不同(鋅指個數不同)則功能也不同。鋅指蛋白與不同長度的DNA的結合依賴于指結構的數量，多指結構可能與復合物的結合穩定性有關，而復合物是RNA聚合酶轉錄的作用位點。研究發現，許多鋅指蛋白的鋅指結構域相互連接區域也是高度保守的，這一區域通常含有下列序列：His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr,Phe)-X-Cys，其中組氨酸與半胱氨酸為金屬離子的結合位點，而X為可變氨基酸殘基。這一區域對于鋅指結構的形成是必需的，指結構的數量將直接影響鋅指蛋白與不同長度的DNA結合，且多指結構與復合物的結合穩定性有關[Jeremy?M.Berg,Annu.Rev.Biophys.Chem,1990,19:405-421]。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人鋅指蛋白35的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人鋅指蛋白12。

由于如上所述人鋅指蛋白12蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人鋅指蛋白12以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白12的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白12的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人鋅指蛋白12的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人鋅指蛋白12的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人鋅指蛋白12的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人鋅指蛋白12異常相關的疾病的方法。