[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白9和編碼這種多肽的多核苷酸

在審

• 申請號: 00115704.3
• 申請日: 2000-05-16
• 公開（公告）號: CN1323815A
• 公開（公告）日: 2001-11-28
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人鋅指蛋白9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鋅指蛋白是一種DNA結合蛋白，最早在非洲爪蟾RNA聚合酶Ⅲ介導的5S?rRNA基因轉錄因子TFⅢA蛋白的氨基酸序列中發現。此后發現鋅指蛋白在不同生物的各種組織中均有表達，這些組織包括造血細胞、腦、神經系統、表皮組織、各種與分泌吸收相關的組織及與腫瘤和無限增殖細胞系相關的組織等。鋅指結構主要有兩類：

1、Zn原子與2個Cys、2個His殘基結合(C₂/H₂)

如典型的TFⅢA的鋅指結構是Cys-Cys……His-His排列。在這類鋅指單元中有一段相對保守的序列：(Tyr,Phe)-X-Cys-X.(2-4)-Cys-X.3-Phe-X.5-Leu-X.2-His-X(3-5)-His。

2、Zn原子與4個Cys殘基結合(C₂/C₂)

Zn與Cys-Cys……Cys-Cys結合，一般特點是在內配體之間的一段氨基酸序列不象TFⅢA那樣含有保守的酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸等疏水性氨基酸，但含有酸性氨基酸。很可能酸性氨基酸與堿性氨基酸形成鹽橋，而不是形成一種疏水區。

此外，還有一類鋅指結構在酵母的基因活化因子發現的，2個Zn原子緊密靠在一起與6個Cys配合，形成一個“鋅簇”核心的結構。

在鋅指蛋白中，Zn的作用是使蛋白質分子形成指型構象的骨架與DNA結合。

鋅指結構在許多與“蛋白-核酸”和“蛋白-蛋白”相互作用有關的蛋白里都有發現。鋅指蛋白可以與雙鏈DNA(dsDNA)或單鏈RNA結合，功能一般與基因表達的調控有關，可能有轉錄因子和信號傳遞因子的作用[Miller,1985,]。現有的研究表明，C₂H₂類型的鋅指結構域在發育調控中起關鍵作用。例如，在DrosopilaKruppel(Rosenberg,1986)和hunchback(Tautz,1987)鋅指蛋白中，此結構域與胚胎模式形成有關；在鼠Krox-20鋅指蛋白中，此結構域與后腦模式形成及細胞增殖控制有關(Chavrier,1988；Wilkinson,1989)；有些鋅指蛋白與腫瘤形成有關，如Gli-3在Greig綜合癥中(vortkamp,1991),WT1在Wilm’s腫瘤中(Haber,1990)。

編碼鋅指蛋白的多聚核苷酸，及其所編碼的鋅指蛋白的發現為研究細胞在正常及病理條件下的分化、增殖的生理生化過程提供了一種方法，也為診斷、治療與細胞分化增殖紊亂而造成的疾病包括癌癥提供了一種新途徑。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人鋅指蛋白59的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人鋅指蛋白9。

由于如上所述人鋅指蛋白9蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人鋅指蛋白9以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白9的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白9的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人鋅指蛋白9的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人鋅指蛋白9的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人鋅指蛋白9的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人鋅指蛋白9異常相關的疾病的方法。