[發(fā)明專利]一種新的多肽——人SOX9蛋白13和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00115615.2
• 申請(qǐng)日: 2000-05-09
• 公開（公告）號(hào): CN1322740A
• 公開（公告）日: 2001-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人SOX9蛋白13，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

性別是遺傳信息交換和重組所決定的，多數(shù)真核生物都以雌、雄這兩種互補(bǔ)的形式存在，雌、雄是在一種共同的運(yùn)動(dòng)中，由于偶然的機(jī)會(huì)攜帶了某種遺傳物質(zhì)而形成的。在哺乳動(dòng)物中，所有的卵子均含有一X染色體，性別的遺傳性主要依賴于精子細(xì)胞的表型。若精子貢獻(xiàn)了X，則卵子就得到了XX型；若精子貢獻(xiàn)了Y，那么卵子就得到了XY型，即最終發(fā)育成雄性。Y染色體之所以具有如此重要的決定權(quán)是由于其攜帶有一個(gè)主導(dǎo)基因SRY(Y染色體的性別決定區(qū)域)。SRY的激活產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄因子TDF(睪丸決定因子)，TDF中含有一HMG(高遷移基團(tuán))類的DNA結(jié)合區(qū)域，兩者一經(jīng)結(jié)合，可使TDF指導(dǎo)激活次級(jí)基因的活性。由上可知，Y染色體之所以決定著生物的性別，主要由其SRY基因的作用所決定的。SRY基因在體內(nèi)的突變、易位或表達(dá)異常，都將影響生物體性別的正確形成，因而引發(fā)各種相關(guān)的發(fā)育紊亂性疾病。

人們已從各種不同生物的Y染色體上克隆得到了SRY基因，并證實(shí)該基因的突變或表達(dá)異常將導(dǎo)致生物性別的異常，進(jìn)而引發(fā)各種相關(guān)的疾病。1994年，F(xiàn)oster等人又從人中克隆得到了一與SRY基因相關(guān)的基因--SOX9基因，該基因與SRY基因相似，其所編碼的蛋白的氨基酸序列中亦含有一HMG盒結(jié)構(gòu)域[FosterJ.W.,Dominguez-Steglich?M.A.et?al.,1994,Nature,272(6506):525-530]。SOX9蛋白被證實(shí)在生物體內(nèi)參與調(diào)控睪丸等組織的發(fā)育與生長(zhǎng)，研究發(fā)現(xiàn)，該蛋白氨基酸序列的C末端含有一反式激活結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域的突變或表達(dá)異常通常將引發(fā)生物體內(nèi)常染色體性別逆轉(zhuǎn)及骨骼發(fā)育異常綜合癥等疾病[NobuhikoTakamatsu,Hiromi?Kanda?et?al,1997,Gene,202:167-170]。

由上可知，SOX9蛋白與已知的生物體性別決定蛋白SRY相似，其蛋白序列的C末端含有一保守的反式激活結(jié)構(gòu)域，且其序列中還含有一高度保守的HMG盒結(jié)構(gòu)域。HMG盒結(jié)構(gòu)域在蛋白作用及性別決定過程中起著重要的決定因素，而反式激活結(jié)構(gòu)域亦在蛋白作用過程中起重要調(diào)控作用。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的突變或表達(dá)異常都將導(dǎo)致蛋白的作用異常，進(jìn)而影響生物體性別的形成及骨骼等組織的發(fā)育與生長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)，不同生物來源的SOX9蛋白均含有高度的同源性，該蛋白在進(jìn)化上高度保守。SOX9蛋白在生物體內(nèi)通常與各種常染色體性別逆轉(zhuǎn)及骨骼發(fā)育紊亂性疾病等的發(fā)生密切相關(guān)。該蛋白還可用于診斷及治療上述各種相關(guān)的疾病。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時(shí)的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時(shí)的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人SOX9蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人SOX9蛋白13。

由于如上所述人SOX9蛋白13蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人SOX9蛋白13蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人SOX9蛋白13蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--人SOX9蛋白13以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人SOX9蛋白13的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人SOX9蛋白13的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人SOX9蛋白13的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽--人SOX9蛋白13的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽--人SOX9蛋白13的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人SOX9蛋白13異常相關(guān)的疾病的方法。