[發(fā)明專利]一種新的多肽——連環(huán)蛋白10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115566.0
• 申請日: 2000-04-29
• 公開（公告）號: CN1321647A
• 公開（公告）日: 2001-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--連環(huán)蛋白10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

細(xì)胞-細(xì)胞以及細(xì)胞-基質(zhì)連接需要轉(zhuǎn)膜糖蛋白的參與，這些轉(zhuǎn)膜糖蛋白包括粘附分子和整合蛋白通過它們的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域與粘附在細(xì)胞骨架上的蛋白質(zhì)反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)它們的功能[Takeichi,M.1991.Science251:1451-1455]。很少有將轉(zhuǎn)膜蛋白錨定在細(xì)胞骨架上的分子內(nèi)蛋白得到確認(rèn)。粘著斑蛋白已經(jīng)確認(rèn)是結(jié)合在F肌動蛋白和踝蛋白上[Westmeyer,A.,Ruhnau,K.,Wegner,A.,andJockush,M.1990.EMBO?J.9:2071-2078]；踝蛋白又依次結(jié)合在纖連蛋白受體β-1亞基的C末端區(qū)域[Horwi?tz,A.F.,Duggan,K.,Buck,C.A.,Beckerle,M.C.,andBurridge,K.1988.Nature320:531-533]。同樣，鈣粘著蛋白活性的實(shí)現(xiàn)則依賴于一種叫連環(huán)蛋白(CAP)的蛋白質(zhì)將其錨定在細(xì)胞骨架上，鈣粘著蛋白能調(diào)節(jié)同嗜性依賴鈣離子的細(xì)胞-細(xì)胞聯(lián)系。近期發(fā)現(xiàn)的小鼠102-kDaα-連環(huán)蛋白(CAP102)在蛋白質(zhì)水平上與粘著斑蛋白5個(gè)結(jié)構(gòu)域中的3個(gè)有著非常重要的相似性[Nagafuchi,A.,Takeichi,M.,and?Tsukita,S.1991.Ce1165:849-857]：這三個(gè)結(jié)構(gòu)域包括踝蛋白結(jié)合位點(diǎn)，肌動蛋白結(jié)合區(qū)域和粘著斑蛋白自身結(jié)合區(qū)域。

現(xiàn)在，生物學(xué)家又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)與CAP102蛋白在蛋白質(zhì)水平上有著80％相同性的人類蛋白-CAP-R蛋白。盡管CAP-R與CAP102有如此高的相同性，CAP-R很可能并不是α-連環(huán)蛋白的人類同系物。

CAP-R蛋白包含647個(gè)氨基酸殘基，分子量為104kDa，等電點(diǎn)為5.4。蛋白質(zhì)位點(diǎn)包括：34個(gè)可能的蘇氨酸/絲氨酸磷酸化位點(diǎn)，1個(gè)酪氨酸(Y-647)硫酸化位點(diǎn)以及3個(gè)酰胺化位點(diǎn)。CAP102和CAP-R蛋白的結(jié)構(gòu)主要是轉(zhuǎn)角折疊(60％)和盤繞(30％)結(jié)構(gòu)。另外，CAP-R中的[812-859]插入序列可能是盤繞結(jié)構(gòu)的延伸并且可能構(gòu)成一個(gè)獨(dú)立的β片層結(jié)構(gòu)域。

CAP-R和CAP102有三個(gè)區(qū)域非常保守：[4-213],[670-805],[904-1003]。另外，CAP-R[811-859]的插入序列與類型1神經(jīng)纖維瘤基因產(chǎn)物-一個(gè)GTP酶激活蛋白的[290-333]區(qū)域有較大的同源性[Marchuk,D.A.,Saulino,A.M.,etal.,1992.Genomics?11:931-940]。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時(shí)的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時(shí)的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與CAP-R蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為連環(huán)蛋白10。

由于如上所述連環(huán)蛋白10蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的連環(huán)蛋白10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新連環(huán)蛋白10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--連環(huán)蛋白10以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼連環(huán)蛋白10的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼連環(huán)蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)連環(huán)蛋白10的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對本發(fā)明的多肽--連環(huán)蛋白10的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對本發(fā)明多肽--連環(huán)蛋白10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與連環(huán)蛋白10異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。