[發(fā)明專利]一種新的多肽——人二氫乳清酸酶21和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115557.1
• 申請日: 2000-04-29
• 公開（公告）號: CN1321769A
• 公開（公告）日: 2001-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/527;C12Q1/68;A61K38/51
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人二氫乳清酸酶21，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

二氫乳清酸酶(DHOase)，又稱為氨甲酰天冬氨酸脫水酶，催化嘧啶生物合成的第三階段的從頭開始，使脲基琥珀酸(N-氨基甲酰-L-天冬氨酸)轉(zhuǎn)化為二氫乳清酸。二氫乳清酸酶是極少數(shù)不用直接偶聯(lián)例如ATP之類的能量即可生物合成一個氨基鍵催化反應(yīng)的酶之一，催化了N-氨基甲酰-L-天冬氨酸的環(huán)化，這個催化反應(yīng)還結(jié)合一個催化活性所必須的鋅原子。

在細(xì)菌中，二氫乳清酸酶是由兩條同樣的400個氨基酸殘基左右的長鏈組成的二聚物；在更高的真核生物中，二氫乳清酸酶是一個有多種功能的大蛋白的一部分；在果蠅、哺乳類中，它催化嘧啶生物合成的前三步。二氫乳清酸酶位于這個多聚蛋白的中心。在酵母中，二氫乳清酸酶由單功能蛋白基因(URA4)編碼。然而，一個二氫乳清酸酶突變株發(fā)現(xiàn)了由多功能蛋白基因(URA2)編碼，催化嘧啶合成的前兩步。

有些代謝途徑幾乎在所有的器官中普遍存在，編碼催化這些途徑的酶的基因一定是古老的、重要的。嘧啶生物合成的從頭開始途徑就是這樣一個例子。比較不同來源的二氫乳清酸酶氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)兩個高度保守序列。一個在N末端，含有兩個組氨酸殘基，被認(rèn)為與結(jié)合鋅原子有關(guān)；另一個在C-末端。我們建立了這兩個區(qū)域信號模式。

N末端的保守序列：D-[LIVMFYWSAP]-H-[LIVA]-H-[LIVF]-[RN]-x-[PGN]

???????????其中，兩個H可能是鋅配位體的位點。C末端的保守序列：[GA]-[ST]-D-x-A-P-H-x(4)-K

適用除尿囊素酶以外的所有與二氫乳清酸酶有關(guān)酶。

本次發(fā)現(xiàn)的二氫乳清酸酶N末端和C末端的保守序列，有助于我們進一步了解嘧啶代謝的過程，對于生物體嘧啶代謝疾病的防治有重要的意義。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人二氫乳清酸酶9的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人二氫乳清酸酶21。

由于如上所述人二氫乳清酸酶21蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人二氫乳清酸酶21蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人二氫乳清酸酶21蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽--人二氫乳清酸酶21以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人二氫乳清酸酶21的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人二氫乳清酸酶21的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人二氫乳清酸酶21的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽--人二氫乳清酸酶21的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽--人二氫乳清酸酶21的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人二氫乳清酸酶21異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中191-772位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1228位的序列。