[發明專利]一種新的多肽——人K－ras原癌基因蛋白36和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00115526.1
• 申請日: 2000-04-29
• 公開（公告）號: CN1321661A
• 公開（公告）日: 2001-11-14
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人K-ras原癌基因蛋白36，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在生物體內存在著很大一類蛋白，其通過與活化的酪氨酸激酶受體相作用，將信號傳導至細胞核內以調節相關基因的表達，影響細胞的增殖與分化，該類蛋白組成了一獨立的蛋白家族即Ras蛋白家族。Ras蛋白是ras基因的轉錄表達產物，其通過共價鍵與異戊烯基連接使之錨定在質膜的胞質側面上，進而活化一系列與之相關的蛋白活性，以傳導體內各種信號分子，調控細胞的發育與生長。Ras蛋白不是蛋白激酶，其在體內作為一種分子開關，與鳥苷酸結合，特別是與GDP、GTP結合發揮其生物活性。當其與GTP結合時即活化了Ras，而與GDP結合時則鈍化了Ras的活性。

研究發現，活化的Ras蛋白向其下游發放信號是以脈沖方式進行的。在細胞內還存在著大量的相關的蛋白，如Raf蛋白、鳥苷酸釋放因子等。Raf蛋白是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，催化蛋白絲/蘇氨酸位點的磷酸化。當Ras蛋白被激活后，位于細胞溶質中的Raf蛋白即趨向到質膜胞內側并與Ras蛋白結合，Ras蛋白即激活Raf蛋白在體內的活性。Raf蛋白活化后在向下游傳遞信號的過程中即包含了許多絲/蘇氨酸殘基磷酸化級聯反應，其中最重要的一種是有絲分裂原活化蛋白激酶。這些激酶被眾多細胞外誘導細胞增殖和分化的信號激活，以調控著體內各種生理學過程的進行。近年的研究發現，在一些腫瘤細胞中，異常的Ras蛋白，在其蛋白序列的12位或61位殘基的點突變，將抑制蛋白本身及由GAP刺激的GTP酶活性，即不能使Ras-GTP轉變成Ras-GDP，從而導致Ras蛋白在體內長期處于活性狀態，不停地向下游發放信號，即引起體內細胞的異常增殖。

人們已從不同的生物體內克隆得到了多種不同的Ras蛋白家族的成員。1987年，Kahn等人又從人中克隆得到了一Ras蛋白家族的新成員----c-K-ras原癌基因，該基因的突變體在人的多種腫瘤細胞中均有表達，其在腫瘤形成、惡化前及惡化后等多種階段發揮著重要的調控作用。由此可知，該c-K-ras原癌基因所編碼的蛋白在生物體內與多種組織及細胞的腫瘤及惡性疾病的發生均密切相關，該蛋白的突變或表達異常將導致生物體相關組織及細胞發育及分化的異常，是相關組織腫瘤及癌癥發生的主要原因之一[Kahn?S.,Yamamoto?F.et?al.,1987,Anticancer?Res,7:639-652]。

由上可知，c-K-ras原癌基因所編碼的蛋白是Ras蛋白家族的一個新成員，該蛋白在生物體內作為一種分子開關調控著相關基因在體內的表達，進而影響細胞的分化及增殖。該蛋白的突變或表達異常將導致蛋白在體內的作用異常，進而影響相關的生物學過程的進行。該蛋白在生物體內通常與各種發育紊亂性疾病、相關組織的腫瘤及癌癥等疾病的發生密切相關。該蛋白還可用于診斷及治療上述各種相關的疾病。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人K-ras原癌基因蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人K-ras原癌基因蛋白36。

由于如上所述人K-ras原癌基因蛋白36蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人K-ras原癌基因蛋白36蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人K-ras原癌基因蛋白36蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人K-ras原癌基因蛋白36以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人K-ras原癌基因蛋白36的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人K-ras原癌基因蛋白36的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人K-ras原癌基因蛋白36的方法。