[發明專利]一種新的多肽——人kingle蛋白15和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00115511.3
• 申請日: 2000-04-29
• 公開（公告）號: CN1321651A
• 公開（公告）日: 2001-11-14
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人kingle蛋白15，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

Kringle是一種特殊的蛋白質二級結構，最初在人的凝血素中發現，后發現以不同拷貝存在于人的血纖維蛋白酶原、組織纖維蛋白酶原激活因子、尿激酶、載脂蛋白A等蛋白中。這些Kringle有相同的起源，在進化過程中為了適應不同的功能，因而產生了各不相同的分化，但在總的結構上保持相似。每個Kringle是結構上獨立的單位，以二硫鍵橋交叉結合形成結構域。

Kringle既可以單拷貝的形式存在又可以多拷貝的形式存在，比如在載脂蛋白A中就有高達38個拷貝，而在凝血因子Ⅻ中僅有一個拷貝，通常多個拷貝的Kringle之間形成一系列小的串聯結構。對多種Kringle的二級結構進行分析比較，發現結構域中呈現較多的β-折疊，而α-螺旋結構卻很少。在多種蛋白的Kringle序列中，有一段較為保守的氨基酸結構：[Phe-Tyr]-Cys-Arg-Asn-Pro-[Asp-Asn-Arg]。

在各種含有Kringle結構的蛋白中，Kringle的構象并不完全相同，因而在功能特性上也產生了差異，許多功能上的差異是由于某些氨基酸的變更引起的。Kringle區域起著蛋白質之間的結合介質的作用，結合諸如膜、其它蛋白質或磷脂等，并且也有調節蛋白水解活性的功能。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人kingle蛋白8的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人kingle蛋白15。

由于如上所述人kingle蛋白15蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人kingle蛋白15蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人kingle蛋白15蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人kingle蛋白15以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人kingle蛋白15的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人kingle蛋白15的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人kingle蛋白15的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人kingle蛋白15的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人kingle蛋白15的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人kingle蛋白15異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中72-473位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1311位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。