[發(fā)明專利]一種新的多肽——人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115510.5
• 申請日: 2000-04-29
• 公開（公告）號: CN1321767A
• 公開（公告）日: 2001-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N9/50;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/48
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在哺乳動物及酵母中，Lon型蛋白水解酶家族的成員催化線粒體基質(zhì)蛋白ATP依賴的降解過程。人們已從細菌、酵母及人等多種生物體內(nèi)克隆得到了多種Lon蛋白水解酶家族的成員，且發(fā)現(xiàn)人LON蛋白水解酶在各種組織中均有表達，這些蛋白在細胞核內(nèi)編碼，其氨基酸序列的N末端含有一潛在的線粒體定位前序列[Wang?N.,Gotte?sman?S.et?al.,1993,Prog?Natl?Acad?Sci?USA,90:11247-11251]。

1998年，Barakat?S.等從maize中克隆得到了LON1蛋白，該蛋白為Lon型蛋白水解酶家族的新成員。LON1蛋白與已知的細菌及人的Lon蛋白水解酶在蛋白序列上均有較高的相似性，均具有一保守的底物結(jié)合結(jié)構(gòu)域及一ATP結(jié)合結(jié)構(gòu)域；且該蛋白與Lon蛋白家族的其他成員有相似的生物學功能，在生物體內(nèi)與生物的呼吸作用過程密切相關(guān)，其可維持線粒體DNA的完整性，但并不是細胞色素復合物的組成成分[Barakat?S.,Pearce?DA.et?al.,1998,Plant?Mol?Biol,37:141-154]。由上可知，Lon蛋白水解酶家族的成員在生物體內(nèi)有著廣泛的生物學功能，其表達異常將導致可致線粒體DNA結(jié)構(gòu)異常，并影響呼吸鏈功能，導致物質(zhì)與能量代謝異常。

Lon蛋白水解酶家族的成員發(fā)揮其酶活性均依賴于ATP水解所釋放的能量，及其催化活性中心的絲氨酸活性位點。該酶家族的成員的N末端均含有一保守的ATP結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域在生物體內(nèi)負責與ATP結(jié)合以水解ATP，為酶發(fā)揮作用提供所需的能量；除此之外，該酶家族的成員還含有以下保守的一致性序列片段：

D-G-[PD]-S-A-[GS]-[LIVMCA]-[TA]-[LIVM](其中S為活性絲氨酸位點)；

該序列片段為酶的催化活性中心，在酶發(fā)揮正常生理學功能過程中發(fā)揮著重要作用。該序列的突變將影響酶在生物體內(nèi)的催化活性。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶48的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1。

由于如上所述人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人ATP依賴的絲氨酸蛋白水解酶9.1異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。