[發(fā)明專利]一種新的多肽——人磷脂酶12和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115466.4
• 申請日: 2000-04-27
• 公開（公告）號: CN1320695A
• 公開（公告）日: 2001-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/16;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/34;C12Q1/68;A61K38/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人磷脂酶12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

磷酸甘油脂(簡稱磷脂)種類繁多，體內(nèi)周轉(zhuǎn)更新快，是細(xì)胞膜、細(xì)胞器膜的主要組成部分。磷脂組成的變化對細(xì)胞膜流動性，膜蛋白的活性等細(xì)胞生理功能有重要的調(diào)節(jié)作用。磷脂在生物體內(nèi)，經(jīng)水解為甘油、脂肪酸、磷酸和各種氨基醇等。磷脂酶分為四類，即磷脂酶A₁,A₂,C和D，它們分別作用于磷脂不同的脂鍵。其中磷脂酶A1專一地水解磷脂分子內(nèi)C1位的脂肪酸，磷脂酶A₂專一地水解磷脂分子C₂位脂肪酸，而磷脂酶C和D則對磷酸雙脂鍵的水解起作用。

磷脂酶C(PLC)在跨膜信號傳導(dǎo)過程中起重要作用。例如，實(shí)驗(yàn)證明PLC的活化是人單核白細(xì)胞干擾素4受體信號傳遞的必要條件。活化的PLC將細(xì)胞膜中4,5-雙磷酸磷脂酰基醇(PIP₂)水解為甘油二酰(DAG)和1,4,5三磷酸肌醇(IP3)。而IP3和DAG均可以作為第二信使分別傳導(dǎo)激活蛋白激酶C、促進(jìn)鈣的釋放和等一系列細(xì)胞內(nèi)生化反應(yīng)，并最終對分泌、神經(jīng)活性、代謝及細(xì)胞繁殖等細(xì)胞活動進(jìn)行調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)原發(fā)性乳房癌患者也同時表現(xiàn)出EGF受體及PLC-gamma-1的水平增加。同樣的，對原發(fā)性高血壓老鼠的研究表明高血壓病發(fā)的一個主要原因就是由于PLC的X和Y區(qū)域的氨基酸順序點(diǎn)突變而造成PLC-delta-1的異常活化。

很多磷脂酶A2(PLA2)是從蛇、蜥蜴、蜜蜂和哺乳動物中獲得的。作為一種突觸前的神經(jīng)毒素，毒蛇的PLA2能夠阻斷已酰膽堿從神經(jīng)末端的釋放從而抑制神經(jīng)肌肉的傳導(dǎo)。人類PLA2在磷脂的消化及代謝以及炎癥反應(yīng)前體合成等重要細(xì)胞過程中起作用。臨床研究證明血漿與關(guān)節(jié)潤滑液中PLA2的水平增高與關(guān)節(jié)炎發(fā)病強(qiáng)度表現(xiàn)出正相關(guān)，而一些細(xì)胞內(nèi)毒素與免疫調(diào)節(jié)因子對PLA2的作用有關(guān)鍵性影響。研究還表明PLA2的拮抗性蛋白對與包括關(guān)節(jié)炎、過敏性炎癥、皮膚炎、眼炎以及膠原炎等疾病的治療有效，并能同時避免由化合物治療炎癥引起的種種副作用。

磷脂作為乳化劑被廣泛地應(yīng)用于食品、香料及藥物生產(chǎn)中，但近期研究證明PLA1的水解催化反應(yīng)產(chǎn)物溶血磷脂在酸性條件以及不同的溫度條件下更穩(wěn)定，因而可能更適合這類工廠化生產(chǎn)。另外PLA1還被發(fā)現(xiàn)與保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能的完整性重要相關(guān)。例如，實(shí)驗(yàn)證明PLA1的主要產(chǎn)物之一的磷脂酰絲氨酸能夠抑制細(xì)胞分裂素引起的T細(xì)胞活化，二氧化氮引起的細(xì)胞過氧化傷害與PLA1的活性增高直接相關(guān)，PLA1對于紫癜等血小板減少等疾病有一定影響以及細(xì)胞內(nèi)毒素的刺激能夠引起PLA1在心臟、肝臟和血清中活性的增高等。

磷脂酶A1,A2和C雖然有其催化底物的特異性，但在體內(nèi)更可能是協(xié)同作用的，甚至在功能上可能在一定條件下存在互補(bǔ)的作用。在體外實(shí)驗(yàn)中PLA1與PLA2可以在一定條件下交換彼此的底物。在體內(nèi)，PLA1、PLA2和PLC也經(jīng)常被發(fā)現(xiàn)形成一條磷脂水解反應(yīng)系統(tǒng)鏈而存在。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人磷脂酶14的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人磷脂酶12。

由于如上所述人磷脂酶12蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人磷脂酶12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人磷脂酶12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽--人磷脂酶12以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人磷脂酶12的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人磷脂酶12的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人磷脂酶12的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽--人磷脂酶12的抗體。