[發明專利]一種人神經原谷酰胺轉運蛋白及其編碼序列

無效

• 申請號: 00115372.2
• 申請日: 2000-04-11
• 公開（公告）號: CN1272545A
• 公開（公告）日: 2000-11-08
• 發明（設計）人: 李能干;康波愈;彭永德;李月彬;顧彥杰;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛

本發明涉及分子生物學、生理學以及基因工程等領域。具體地，本發明涉及一種在人類下丘腦中表達的hNGT蛋白及其核酸序列。本發明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

哺乳動物中央神經系統中的主要興奮遞質是谷氨酸鹽，而后者的首選前體則是谷酰胺。在挪威鼠中，L-谷酰胺是神經原谷酰胺轉運蛋白(neuronal?glutaminetransporter，NGT)的首選底物。轉運過程是Na依賴的，并且會被一種中性氨基酸轉運系統特異性抑制劑a-甲氨基異丁酸所抑制。(J?Biol?Chem，Vol.275，Issue?6，4049-4054，February?11，2000)。對此過程的深入研究將有助于揭示神經傳導之謎，對哺乳動物腦功能的研究也將起到重要作用。

本發明中，我們在人類下丘腦中克隆到挪威鼠NGT基因的同源基因hNGT。

在本發明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hNGT蛋白序列及其核酸序列。

本發明的第一目的就是提供一種新的人基因hNGT(Genbank?AccessionNo.AF247166)，該基因是一個人hNGT蛋白基因。

本發明的第二目的是提供一種新的人蛋白hNGT。

本發明的第三目的是提供一種利用重組技術生產上述的新的人hNGT蛋白和核酸序列的方法。

本發明還提供了這種人hNGT蛋白多肽和編碼序列的應用。

在本發明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hNGT蛋白質活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第159-1742位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第159-1742位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第159-1742位的核苷酸序列。

在本發明的另一方面，提供了一種分離出的人hNGT蛋白質多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.7序列的多肽。

在本發明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞。在一個實例中該宿主細胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細胞是真核細胞。

在本發明的另一方面，還提供了一種產生具有人hNGT蛋白質活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有人hNGT蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成人hNGT蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第159-1742位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞，形成人hNGT蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達人hNGT蛋白多肽的條件下，培養步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有人hNGT蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.6中第159-1742位的序列。

本發明還提供了與hNGT蛋白多肽特異性結合的抗體。

在本發明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態下位于其兩側的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經與天然狀態下伴隨核酸的組份分開，而且已經與在細胞中伴隨其的蛋白質分開。

在本發明中，術語“人hNGT蛋白(或多肽)編碼序列”指編碼具有人hNGT蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ?ID?NO.6中第159-1742位核苷酸序列及其簡并序列。該簡并序列是指，位于SEQ?ID?NO.6序列的編碼框第159-1742位核苷酸中，有一個或多個密碼子被編碼相同氨基酸的簡并密碼子所取代后而產生的序列。由于密碼子的簡并性，所以與SEQ?ID?NO.6中第159-1742位核苷酸序列同源性低至約70％的簡并序列也能編碼出SEQ?ID?NO.7所述的序列。該術語還包括能在中度嚴緊條件下，更佳的在高度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第159-1742位的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。該術語還包括與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第159-1742位的核苷酸序列的同源性至少70％，較佳地至少80％，更佳地至少90％，最佳地至少95％的核苷酸序列。