[發(fā)明專利]一種人基因表達(dá)調(diào)節(jié)因子相關(guān)蛋白及其編碼序列

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115369.2
• 申請日: 2000-04-11
• 公開（公告）號: CN1272543A
• 公開（公告）日: 2000-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李能干;肖華勝;劉鋒;宋懷東;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權(quán)）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 復(fù)旦大學(xué)專利事務(wù)所
• 代理人: 陸飛

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、酶學(xué)、生理學(xué)以及基因工程等領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種在人類造血干細(xì)胞中表達(dá)的hNIF3-s蛋白及其核酸序列。本發(fā)明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

受半乳糖基因GAL4調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄過程在葡萄糖培養(yǎng)基中受到抑制，NGG1基因在這過程中必不可少。實驗證明NGG1抑制了GAL啟動子的功能。(EMBO?J?1993?Dec15；12(13)：5255-65)。(J?Biol?Chem?1996?Apr?19；271(16)：9298-306)。進一步的研究表明，NGG1基因與另外兩個基因一起，雙向調(diào)節(jié)(刺激或者抑制)著酵母中一簇轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)蛋白。(J?Biol?Chem?1997?Feb?28；272(9)：5571-8)。這樣，NGG1基因間接地影響到酵母的生長周期、復(fù)制周期，進一步影響到以酵母為生產(chǎn)載體的工程的工程效率。

NGG1基因本身也受到幾種蛋白的制約調(diào)節(jié)作用，這其中便包含了NGG1相互作用蛋白因子3(NGG1-INTERACTING?FACTOR?3，NIF3)。NIF3作用于NGG1，同樣級聯(lián)影響了酵母中若干基因的轉(zhuǎn)錄過程，從而又影響了酵母的生長周期。(Yeast?13，1077-1090(1997))。

本發(fā)明中，我們在人類造血干細(xì)胞中克隆到Sc.ccharomyces?cerevisiae?NIF3基因的同源基因hNIF3-s。

在本發(fā)明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hNIF3-s蛋白序列及其核酸序列。

本發(fā)明的第一目的就是提供一種新的人基因hNIF3-s(Genbank?AccessionNo.AF182416)，該基因是一個人hNIF3-s蛋白基因。

本發(fā)明的第二目的是提供一種新的人蛋白hNIF3-s。

本發(fā)明的第三目的是提供一種利用重組技術(shù)生產(chǎn)上述的新的人hNIF3-s蛋白和核酸序列的方法。

本發(fā)明還提供了這種人hNIF3-s蛋白多肽和編碼序列的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hNIF3-s蛋白質(zhì)活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第236-1291位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴(yán)緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第236-1291位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第236-1291位的核苷酸序列。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種分離出的人hNIF3-s蛋白質(zhì)多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.7序列的多肽。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。在一個實例中該宿主細(xì)胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種產(chǎn)生具有人hNIF3-s蛋白質(zhì)活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有人hNIF3-s蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達(dá)調(diào)控序列，形成人hNIF3-s蛋白表達(dá)載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第236-1291位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，形成人hNIF3-s蛋白的重組細(xì)胞；

(3)在適合表達(dá)人hNIF3-s蛋白多肽的條件下，培養(yǎng)步驟(2)中的重組細(xì)胞；

(4)分離出具有人hNIF3-s蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.6中第236-1291位的序列。

本發(fā)明還提供了與hNIF3-s蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。

在本發(fā)明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態(tài)下位于其兩側(cè)的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經(jīng)與天然狀態(tài)下伴隨核酸的組份分開，而且已經(jīng)與在細(xì)胞中伴隨其的蛋白質(zhì)分開。