[發(fā)明專利]一種新的多肽——人S4核糖體蛋白12和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115295.5
• 申請日: 2000-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN1315455A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人S4核糖體蛋白12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

核糖體是合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞器，其唯一功能是按照mRNA的指令由氨基酸合成多肽鏈，它被稱為核糖核蛋白體，簡稱為核蛋白體或核糖體。核糖體幾乎存在于一切細(xì)胞內(nèi)，無論原核還是真核細(xì)胞，均有大量的核糖體存在。核糖體是一種顆粒狀結(jié)構(gòu)，沒有膜包裹，其直徑為25nm，主要成分為蛋白質(zhì)和RNA，核糖體RNA稱為rRNA，蛋白質(zhì)含量約占40％，RNA約占60％。蛋白質(zhì)分子主要分布在核糖體的表面，而rRNA則位于內(nèi)部，兩者靠非共價(jià)鍵結(jié)合在一起。(細(xì)胞生物學(xué)翟中和高等教育出版社pp122-129)核糖體的功能研究將焦點(diǎn)放到了核糖體RNA上，有很多rRNA功能域決定著核糖體的不同功能。(Annu?Rev?Biochem?1991；60?191-227)

S4是最重要的核糖體蛋白之一，它是原核生物小亞單位30S的一種結(jié)合蛋白，同樣它在真核生物中也有同源蛋白，行使相同的生物學(xué)功能。在細(xì)菌和葉綠體中均有S4的表達(dá)，在酵母、高等植物、動(dòng)物體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)有S4及其同源蛋白。

對核糖體蛋白S4晶體研究(由于S4的N末端有41個(gè)不易結(jié)晶的氨基酸，因此切除此41個(gè)氨基酸殘基的剩余部分的結(jié)晶，稱為S4delta-41)的結(jié)果表明，S4delta-41有兩個(gè)功能域，功能域1都是alfa螺旋結(jié)構(gòu)，功能域2含有5個(gè)平行的beta折疊結(jié)構(gòu)和3個(gè)alfa螺旋結(jié)構(gòu)。功能域2是插入在功能域1之中的，功能域2還與真核生物轉(zhuǎn)錄因子的ETS功能域同源。從結(jié)構(gòu)上看，S4的二級(jí)結(jié)構(gòu)的序列為α1-α2-α3-α4-α5-β1-β2-β3-α6-β4-β5-α7，其中功能域1全是α螺旋(α1-α2-α3-α7)，功能域2是α4-α5-β1-β2-β3-α6-β4-β5，并插入在功能域1之中。此外，具體的結(jié)構(gòu)也已經(jīng)得到闡明，有文獻(xiàn)可供參考。(The?EMBOJournal?Vol?17?No16?pp4545-4558,1998)

S4是核糖體的重要組分，原核生物的S4可結(jié)合于16S?rRNA，從而影響翻譯的準(zhǔn)確性、16S?rRNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)等等。(Nowotny?and?Nierhaus,1988；Allenand?Noller,1989)根據(jù)研究，在缺少其他蛋白的情況下，S4也能與16SrRNA相互作用。

S4也是一種RNA結(jié)合蛋白，與其他核糖體蛋白一樣，原核生物的S4核糖體蛋白可以結(jié)合于編碼自身的mRNA(α操縱子mRNA)結(jié)合從而調(diào)控自身的表達(dá)，由于α操縱子mRNA除編碼S4外，還編碼S11,S13和L17，所以S4可以通過結(jié)合于多聚順反子mRNA從而調(diào)控自身和其他一些核糖體蛋白的表達(dá)。(Dean?andNomura,1980；Thoma?set?al.,1987)(The?EMBO?Journal?Vol?17?No16pp4559-4571,1998)

S4與rRNA和mRNA的結(jié)合位點(diǎn)的氨基酸序列沒有特別的同源性，但這兩種RNA的結(jié)構(gòu)相似性也未得到證明，此方面還有待進(jìn)一步研究。

目前的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果還表明，S4在30S的裝配過程、保持翻譯的真實(shí)性中起作用。

綜上所述，S4核糖體蛋白的功能如下：(1)在原核生物中S4可以結(jié)合于16SrRNA，從而影響翻譯的準(zhǔn)確性、16S?rRNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)等等，推測S4在真核生物細(xì)胞內(nèi)也有同樣功能；(2)S4也可結(jié)合于編碼自身的mRNA，從而調(diào)控自身和其他一些核糖體蛋白的表達(dá)；(3)S4還可以促進(jìn)核糖體的小亞基的裝配，在小亞基的裝配過程、保持翻譯的真實(shí)性中起作用；(4)S4還與真核生物轉(zhuǎn)錄因子的ETS功能域同源，因此被推測可以調(diào)控真核生物的轉(zhuǎn)錄過程。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv?304細(xì)胞株、PMA-的Ecv?304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時(shí)的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時(shí)的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人S4核糖體蛋白20的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人S4核糖體蛋白12。