[發明專利]一種新的多肽——人半胱氨酸蛋白9和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00115292.0
• 申請日: 2000-03-29
• 公開（公告）號: CN1315574A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N9/50;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/48
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人半胱氨酸蛋白酶9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

半胱氨酸蛋白酶是一個蛋白水解酶家族。該家族在結構上都包括一個半胱氨酸位點、一個組氨酸側鏈和一個天冬氨酸位點。這三個位點組成了催化活性位點。

現在已經發現了四種人半胱氨酸蛋白酶：組織蛋白酶B，組織蛋白酶L，組織蛋白酶H，組織蛋白酶S。它們最先以蛋白酶原的形式被合成出來，然后被加工成相應的蛋白酶并靶至溶酶體，并在此被加工成成熟的蛋白酶。有些溶酶體蛋白酶前體并不加入上述加工途徑，而是分泌至胞外。因此，溶酶體半胱氨酸蛋白酶被發現被破骨細胞、激活的巨嗜細胞和Ⅰ-細胞病病人的纖維原細胞所分泌。

組織蛋白酶在許多正常細胞生理活動中起重要作用，包括蛋白降解與更新、骨改建、激素前體加工等等。另外，半胱氨酸蛋白酶還參與許多病理過程，例如：風濕性關節炎、血管球性腎炎、阿爾茲海莫氏癥等。

腫瘤與組織蛋白酶的關系十分密切。在不同組織來源的腫瘤細胞中，常常可以觀察到多種組織蛋白酶的超量表達和分泌。例如，組織蛋白酶B在直腸癌、肺癌、子宮頸瘤和乳腺癌等癌癥中超量表達，并且伴有活性增強，與膜結合性增高和分泌性強的特點。血清中組織蛋白酶B的含量可以作為多種癌癥的檢測標準。研究發現，組織蛋白酶H會使一些具有生理活性的多肽失活。另外，組織蛋白酶G的作用途徑與磷酸脂酶C/激酶C的作用途徑相關。組織蛋白酶的表達增高導致PKC調控途徑的紊亂而的導致腫瘤。

癌癥的浸潤和轉移也與組織蛋白酶有關。癌細胞侵入組織時首先要侵入細胞外基質，這是一個主動過程，癌細胞與基底膜緊密接觸，并分泌蛋白溶解酶(包括組織蛋白酶等)將細胞外基質的成分，如層粘連蛋白、纖維粘連蛋白、蛋白多糖和膠原纖維等溶解，使基底膜產生局部的缺損。癌細胞即由此侵入周邊組織中。在多種腫瘤細胞中發現的溶酶體組織蛋白酶分泌泡與此有關。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人半胱氨酸蛋白酶10的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人半胱氨酸蛋白酶9。

由于如上所述人半胱氨酸蛋白酶9蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人半胱氨酸蛋白酶9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人半胱氨酸蛋白酶9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人半胱氨酸蛋白酶9以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人半胱氨酸蛋白酶9的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人半胱氨酸蛋白酶9的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人半胱氨酸蛋白酶9的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人半胱氨酸蛋白酶9的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人半胱氨酸蛋白酶9的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人半胱氨酸蛋白酶9異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中70-333位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-884位的序列。