[發明專利]一種新的多肽——人醌蛋白還原酶9和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00115266.1
• 申請日: 2000-03-29
• 公開（公告）號: CN1315529A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/32;C12Q1/68;A61K38/44
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人醌蛋白還原酶9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

吡咯并喹啉醌(PQQ)是一種氧化還原合酶。其在生物體內作為很多酶的協同因子，特別是作為一些細菌脫氫酶的輔因子。醌蛋白即被認為是一種含有吡咯并喹啉醌的蛋白，當然，其還可能含有其他不同的醌蛋白輔基。對這些蛋白的結構研究發現，這些蛋白均具有顯著的進化相關性，它們在蛋白結構上高度同源。早在三十年前，人們就發現在細菌的甲醇及葡萄糖脫氫酶中存在一種新的輔基，該輔基與吡咯并喹啉醌有較高的同源性。細菌甲醇脫氫酶的活性位點通常與一鈣離子結合以維持酶的正常活性構型，并調節該酶在生物體內的功能[AnthonyC.,Ghosh?M.,1998,Prog?Biophys?Mol?Biol,69:1-21]。另外，研究發現，脫氫酶作用過程中的吡咯并喹啉醌對于生物體內一些營養狀態的維持也起著十分重要的作用。其在不同生物的各種組織中維持著維生素的水平。哺乳動物體內的吡咯并喹啉醌還原酶還在生物體內參與各種抗氧化歧化的過程。由上可知，吡咯并喹啉醌作為一種脫氫酶的輔酶在生物體內參與各種不同的生理過程，含有該酶輔助因子的蛋白的表達異常與生物體各種營養缺陷癥、各種與氧化歧化相關的疾病的發生密切相關[Christensen?H.N.,1994,Nutr.Rev.,52:24-5]。

如上所述的各種脫氫酶均由600-800個氨基酸殘基組成。在其高度保守的序列區域含有兩個一致性序列片段，第一個位于氨基酸序列N末端；而第二個序列位于氨基酸序列的C末端。這兩個一致性序列片段如下所示：序列片段1:[DEN]-W-X(3)-G-[RK]-X(6)-[FYW]-S-X(4)-[LIVM]-N-X(2)

?????-N-V-X(2)-L-[RK]；序列片段2:W-X(4)-Y-D-X(3)-[DN]-[LIVMFY](4)-X(2)-G-X(2)-[STA]-P；所有的醌蛋白脫氫酶均含有這兩個一致性序列片段，這兩個序列片段是脫氫酶作用的活性位點，這兩個序列片段的突變將直接導致酶在生物體內的表達，從而影響酶在體內的活性及作用。該酶在體內通常與一些營養缺陷癥及各種氧化歧化相關的疾病的發生相關。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人醌蛋白還原酶7的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人醌蛋白還原酶9。

由于如上所述人醌蛋白還原酶9蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人醌蛋白還原酶9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人醌蛋白還原酶9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人醌蛋白還原酶9以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人醌蛋白還原酶9的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人醌蛋白還原酶9的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人醌蛋白還原酶9的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人醌蛋白還原酶9的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人醌蛋白還原酶9的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人醌蛋白還原酶9異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；