[發(fā)明專利]一種新的多肽——人核糖體S7蛋白16和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115263.7
• 申請日: 2000-03-29
• 公開（公告）號: CN1315440A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人核糖體S7蛋白16，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

蛋白的正確翻譯對所有細(xì)菌及高等生物都是非常重要的，對蛋白翻譯調(diào)控機(jī)制的研究是從大腸桿菌中得到的。蛋白的翻譯過程主要由各種氨酰基-tRNA合成酶、各種tRNA及核糖體共同作用來完成，其中核糖體和其他輔助因子在一起提供了翻譯過程的全部酶活性，這些酶活性只有在核糖體整體結(jié)構(gòu)完整的情況下才會具備。因而，核糖體及其組成的各亞單位在生物體內(nèi)協(xié)同作用，起著重要的生理學(xué)功能。

核糖體是合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞器，其唯一功能是按照mRNA的指令由氨基酸合成多肽鏈，它被稱為核糖核蛋白體，簡稱為核蛋白體或核糖體。核糖體幾乎存在于一切細(xì)胞內(nèi)，無論原核還是真核細(xì)胞，均有大量的核糖體存在。核糖體是一種顆粒狀結(jié)構(gòu)，沒有膜包裹，其直徑為25nm，主要成分為蛋白質(zhì)和RNA，核糖體RNA稱為rRNA，蛋白質(zhì)含量約占40％,RNA約占60％。蛋白質(zhì)分子主要分布在核糖體的表面，而rRNA則位于內(nèi)部，兩者靠非共價鍵結(jié)合在一起。(細(xì)胞生物學(xué)翟中和高等教育出版社pp122-129)核糖體的功能研究將焦點(diǎn)放到了核糖體RNA上，有很多rRNA功能域決定著核糖體的不同功能。(Annu?Rev?Biochem?1991；60?191-227)

生物有機(jī)體細(xì)胞內(nèi)有兩種基本類型的核糖體：一種是70S(S為Sverdberg沉降系數(shù)單位)的核糖體，所有的原核細(xì)胞的核糖體均為70S真核細(xì)胞線粒體與葉綠體內(nèi)的核糖體也近似于70S。另一種是80S核糖體，真核細(xì)胞的核糖體(除線粒體與葉綠體核糖體外)均為80S。不論70S或80S的核糖體，均由大小不同的兩個亞單位構(gòu)成。

核糖體大小亞單位在細(xì)胞內(nèi)常常游離于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，只有當(dāng)小亞單位與mRNA結(jié)合后大亞單位才與小亞單位結(jié)合形成完整的核糖體。肽鏈合成終止后，大小亞單位解離，又游離存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中。

S7是核糖體小亞單位的結(jié)合蛋白之一，它和同源蛋白存在于絕大多數(shù)原核生物和真核生物細(xì)胞內(nèi)。

所有的核糖體蛋白S7的N末端均含有一保守的區(qū)域，該區(qū)域含有以下一致的序列片段：[DENSK]-x-[LIVMET]-x(3)-[LIVMFT](2)-x(6)-G-K-[KR]-x(5)-[LIVMF]-[LIVMFC]-x(2)-[STA]。在眾多不同生物的核糖體蛋白S7中均含有這一序列片段，這一保守的結(jié)構(gòu)基序?qū)τ诤颂求w蛋白S7與核糖體RNA的結(jié)合過程有重要的意義，該片段可能對核糖體發(fā)揮正常生理學(xué)功能起重要的調(diào)控作用。

根據(jù)對大腸桿菌核糖體蛋白S7的研究，證明核糖體蛋白S7可以直接結(jié)合于16S核糖體RNA的3’末端。

核糖體蛋白S7對于蛋白質(zhì)的翻譯過程有著重要的作用，如果缺失或?qū)ζ溥M(jìn)行化學(xué)修飾，或編碼它的基因發(fā)生突變，都會影響核糖體的功能，降低多肽合成的活性。雖然，對核糖體蛋白S7的功能研究還不夠透徹，但根據(jù)種種研究結(jié)果，可以證明，核糖體蛋白S7的功能包括：(1)對rRNA折疊成有功能的三維結(jié)構(gòu)是十分重要的；(2)在蛋白質(zhì)合成中，核糖體的空間構(gòu)象發(fā)生一系列的變化，核糖體蛋白可能對核糖體的構(gòu)象起“微調(diào)”作用；(3)在核糖體的結(jié)合位點(diǎn)上甚至可能在催化作用中，核糖體蛋白與rRNA共同行使功能。

根據(jù)核糖體蛋白S7的序列相似性，認(rèn)為其屬于核糖體蛋白家族。該蛋白缺失將導(dǎo)致細(xì)胞生長速度減慢[J.Stephen?Gantt,Michael?D.Thompson,1990,J.Biol.Chem.,265:2763-2767]。因而，核糖體蛋白S7在由DNA轉(zhuǎn)錄、翻譯的細(xì)胞增殖過程中起著極為重要的作用。其表達(dá)異常將導(dǎo)致組織的生長速度減慢，從而引發(fā)各種發(fā)育紊亂性疾病，如發(fā)育遲緩等。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人核糖體S7蛋白9的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人核糖體S7蛋白16。