[發(fā)明專利]一種新的多肽——人黃素蛋白亞基57和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115249.1
• 申請日: 2000-03-28
• 公開（公告）號: CN1315431A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人黃素蛋白亞基57，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在細(xì)菌代謝的富馬酸和琥珀酸相互轉(zhuǎn)換過程中，涉及兩種獨(dú)特的和膜結(jié)合的酶化合物。其一是需要厭氧環(huán)境的富馬酸還原酶，另一種是需要有氧環(huán)境的琥珀酸脫氫酶。這兩種酶都有兩個(gè)部分組成，一個(gè)膜外部分包括一個(gè)結(jié)合FAD的黃素蛋白和一個(gè)鐵硫蛋白，一個(gè)疏水部分包括一個(gè)膜固定蛋白和(或)一個(gè)細(xì)胞色素B。真核生物線粒體琥珀酸脫氫酶(即輔酶Q)由二個(gè)亞基組成，一個(gè)黃素蛋白和一個(gè)鐵硫蛋白。

黃素蛋白亞基9是一段分子量約60-70KD的多肽，其N端有一個(gè)保守序列：R-(ST)-H-(ST)-X(2)-A-X-G-G,H即FAD結(jié)合位點(diǎn)，黃素的異咯嗪上的8α-CH2基通過共價(jià)鍵與組氨酸的N-3相結(jié)合。黃素蛋白亞基9還有一些高度保守序列，在N端附近4個(gè)疏水性殘基形成βαβ結(jié)構(gòu)，緊接著是一段α-螺旋形成的側(cè)鏈及一段疏水性的β-折疊。這些序列通過非共價(jià)鍵與FAD分子的AMP部分結(jié)合。另外，在N端下游約300-400個(gè)殘基處形成另一個(gè)AMP結(jié)合域。FAD的結(jié)合受氧化還原電勢變化的影響。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時(shí)的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時(shí)的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人黃素蛋白亞基9的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人黃素蛋白亞基57。

由于如上所述人黃素蛋白亞基57蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人黃素蛋白亞基57蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人黃素蛋白亞基57蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--人黃素蛋白亞基57以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人黃素蛋白亞基57的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人黃素蛋白亞基57的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人黃素蛋白亞基57的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對本發(fā)明的多肽--人黃素蛋白亞基57的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對本發(fā)明多肽--人黃素蛋白亞基57的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人黃素蛋白亞基57異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中23-1582位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-2464位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人黃素蛋白亞基57蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。

本發(fā)明還涉及一種體外檢測與人黃素蛋白亞基57蛋白異常表達(dá)相關(guān)的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本發(fā)明多肽的量或生物活性。