[發(fā)明專利]一種新的多肽——人醌蛋白還原酶18和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115241.6
• 申請日: 2000-03-28
• 公開（公告）號: CN1315525A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人醌蛋白還原酶18，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

吡咯并喹啉醌(PQQ)是一種氧化還原合酶。其在生物體內(nèi)作為很多酶的協(xié)同因子，特別是作為一些細(xì)菌脫氫酶的輔因子。醌蛋白即被認(rèn)為是一種含有吡咯并喹啉醌的蛋白，當(dāng)然，其還可能含有其他不同的醌蛋白輔基。對這些蛋白的結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn)，這些蛋白均具有顯著的進化相關(guān)性，它們在蛋白結(jié)構(gòu)上高度同源。

早在三十年前，人們就發(fā)現(xiàn)在細(xì)菌的甲醇及葡萄糖脫氫酶中存在一種新的輔基，該輔基與吡咯并喹啉醌有較高的同源性。細(xì)菌甲醇脫氫酶的活性位點通常與一鈣離子結(jié)合以維持酶的正常活性構(gòu)型，并調(diào)節(jié)該酶在生物體內(nèi)的功能[AnthonyC.,Ghosh?M.,1998,Prog?Biophys?Mol?Biol,69:1-21]。另外，研究發(fā)現(xiàn)，脫氫酶作用過程中的吡咯并喹啉醌對于生物體內(nèi)一些營養(yǎng)狀態(tài)的維持也起著十分重要的作用。其在不同生物的各種組織中維持著維生素的水平。哺乳動物體內(nèi)的吡咯并喹啉醌還原酶還在生物體內(nèi)參與各種抗氧化歧化的過程。由上可知，吡咯并喹啉醌作為一種脫氫酶的輔酶在生物體內(nèi)參與各種不同的生理過程，含有該酶輔助因子的蛋白的表達異常與生物體各種營養(yǎng)缺陷癥、各種與氧化歧化相關(guān)的疾病的發(fā)生密切相關(guān)[Christensen?H.N.,1994,Nutr.Rev.,52:24-5]。

如上所述的各種脫氫酶均由600-800個氨基酸殘基組成。在其高度保守的序列區(qū)域含有兩個一致性序列片段，第一個位于氨基酸序列N末端；而第二個序列位于氨基酸序列的C末端。這兩個一致性序列片段如下所示：序列片段1:[DEN]-W-X(3)-G-[RK]-X(6)-[FYW]-S-X(4)-[LIVM]-N-X(2)

????-N-V-X(2)-L-[RK]；序列片段2:W-X(4)-Y-D-X(3)-[DN]-[LIVMFY](4)-X(2)-G-X(2)-[STA]-P；所有的醌蛋白脫氫酶均含有這兩個一致性序列片段，這兩個序列片段是脫氫酶作用的活性位點，這兩個序列片段的突變將直接導(dǎo)致酶在生物體內(nèi)的表達，從而影響酶在體內(nèi)的活性及作用。該酶在體內(nèi)通常與一些營養(yǎng)缺陷癥及各種氧化歧化相關(guān)的疾病的發(fā)生相關(guān)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304?40PMA細(xì)胞體cv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人醌蛋白還原酶7的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人醌蛋白還原酶18。

由于如上所述人醌蛋白還原酶18蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人醌蛋白還原酶18蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人醌蛋白還原酶18蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽--人醌蛋白還原酶18以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人醌蛋白還原酶18的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人醌蛋白還原酶18的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人醌蛋白還原酶18的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽--人醌蛋白還原酶18的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽--人醌蛋白還原酶18的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人醌蛋白還原酶18異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；