[發明專利]一種新的多肽——人二氫乳清酸酶12和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00115198.3
• 申請日: 2000-03-28
• 公開（公告）號: CN1315579A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/527;C12Q1/68;A61K38/51
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人二氫乳清酸酶12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

二氫乳清酸酶(DHOase)，又稱為氨甲酰天冬氨酸脫水酶，催化嘧啶生物合成的第三階段的從頭開始，使脲基琥珀酸(N-氨基甲酰-L-天冬氨酸)轉化為二氫乳清酸。二氫乳清酸酶是極少數不用直接偶聯例如ATP之類的能量即可生物合成一個氨基鍵催化反應的酶之一，催化了N-氨基甲酰-L-天冬氨酸的環化，這個催化反應還結合一個催化活性所必須的鋅原子。

在細菌中，二氫乳清酸酶是由兩條同樣的400個氨基酸殘基左右的長鏈組成的二聚物；在更高的真核生物中，二氫乳清酸酶是一個有多種功能的大蛋白的一部分；在果蠅、哺乳類中，它催化嘧啶生物合成的前三步。二氫乳清酸酶位于這個多聚蛋白的中心。在酵母中，二氫乳清酸酶由單功能蛋白基因(URA4)編碼。然而，一個二氫乳清酸酶突變株發現了由多功能蛋白基因(URA2)編碼，催化嘧啶合成的前兩步。

有些代謝途徑幾乎在所有的器官中普遍存在，編碼催化這些途徑的酶的基因一定是古老的、重要的。嘧啶生物合成的從頭開始途徑就是這樣一個例子。比較不同來源的二氫乳清酸酶氨基酸序列，發現兩個高度保守序列。一個在N末端，含有兩個組氨酸殘基，被認為與結合鋅原子有關；另一個在C-末端。我們建立了這兩個區域信號模式。N末端的保守序列：D-[LIVMFYWSAP]-H-[LIVA]-H-[LIVF]-[RN]-x-[PGN]，其中，兩個H可能是鋅配位體的位點。C末端的保守序列：[GA]-[ST]-D-x-A-P-H-x(4)-K，適用除尿囊素酶以外的所有與二氫乳清酸酶有關酶。

本次發現的二氫乳清酸酶N末端和C末端的保守序列，有助于我們進一步了解嘧啶代謝的過程，對于生物體嘧啶代謝疾病的防治有重要的意義。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人二氫乳清酸酶10的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人二氫乳清酸酶12。

由于如上所述人二氫乳清酸酶12蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人二氫乳清酸酶12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人二氫乳清酸酶12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人二氫乳清酸酶12以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人二氫乳清酸酶12的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人二氫乳清酸酶12的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人二氫乳清酸酶12的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人二氫乳清酸酶12的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人二氫乳清酸酶12的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人二氫乳清酸酶12異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中245-562位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1778位的序列。