[發(fā)明專利]一種新的多肽——人膜泡運輸相關(guān)蛋白11和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115175.4
• 申請日: 2000-03-27
• 公開（公告）號: CN1315387A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人膜泡運輸相關(guān)蛋白11，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

P24蛋白家族由膜整合蛋白組成，都包含一個C端的跨膜結(jié)構(gòu)域。所有P24蛋白都具有一個C端跨膜區(qū)苯丙氨酸殘基，位于細胞質(zhì)區(qū)。在所有已知的P24蛋白中，該保守苯丙氨酸殘基下游緊跟著2-3個鹼性氨基酸殘基。C端鹼性殘基的不同排列決定了P24蛋白能結(jié)合不同的COP-coatmer復(fù)合物的亞基。

P24在酵母中的同源蛋白yp24A(亦稱Emp24p)已從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)來源的COP衣被小泡分離得到，與由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運送到高爾基體的一組分泌蛋白的有效輸送有關(guān)(Stamnes?et?al.EMBO?J.1995；14:1329-1339)。P24A喪失功能的酵母細胞電鏡圖片中表現(xiàn)出持續(xù)的運輸小泡累積的下降，由此表明yp24A是是形成運輸小泡所必需的。由于yp24A突變細胞中僅一部分酵母分泌蛋白的運輸受影響，Schimoller等人推測不同的P24酵母同源物可以識別并捕獲完全不同，也可能部分相同的幾類分泌蛋白入分泌小泡。Rothman?et?al.(1996；Science272:227-234)猜測P24同源物可能是作為運載受體[cargo?receptors]來選擇蛋白裝入COP衣被小泡。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人p24蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人膜泡運輸相關(guān)蛋白11。

由于如上所述人膜泡運輸相關(guān)蛋白11蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人膜泡運輸相關(guān)蛋白11蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人膜泡運輸相關(guān)蛋白11蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人膜泡運輸相關(guān)蛋白11以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人膜泡運輸相關(guān)蛋白11的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人膜泡運輸相關(guān)蛋白11的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人膜泡運輸相關(guān)蛋白11的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人膜泡運輸相關(guān)蛋白11的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——膜泡運輸相關(guān)蛋白11的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人膜泡運輸相關(guān)蛋白11異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中4448-4756位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-5027位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細胞和回收表達產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人膜泡運輸相關(guān)蛋白11蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。