[發(fā)明專利]一種新的多肽——質(zhì)子轉移ATP酶24和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115165.7
• 申請日: 2000-03-27
• 公開（公告）號: CN1315508A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N9/00;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
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本發(fā)明屬于生物技術領域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--質(zhì)子轉移ATP酶24，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

質(zhì)子轉移ATP酶可以分為三類：F、P和V類。其中V類(空泡類，vacuolar?typeATPase)位于于動植物和真菌細胞的酸化房室結構相連的內(nèi)膜上，另外也在一些特定的細胞株中發(fā)現(xiàn)與質(zhì)膜結合。在一些哺乳動物來源的組織中已經(jīng)分離出了v-ATPase。這些組織包括腎上腺分泌小泡、腦內(nèi)涵素包被的小泡和腎臟髓質(zhì)微粒體等等。

在結構上，V-ATP酶與F-ATP酶類似，都含有一個跨膜的通道，質(zhì)子由此穿越質(zhì)膜；還含有一個膜外的催化結構，催化ATP的合成。這兩個部分分別稱為V0和V1。【J?Biol?Chem,Vol.273,Issue?18,10939-10947,May?1,1998】

質(zhì)子轉移ATP酶(proton-t?ranslocating?ATPase)的基本作用是使質(zhì)子穿過質(zhì)膜，并且合成ATP。它在能量存儲、主動運輸、蛋白分揀、酵素活化、受體介導的內(nèi)吞作用、細胞內(nèi)房室的酸化以及細胞內(nèi)pH值的恒定等等細胞生理活動中起重要作用。V-ATPa?se可能與在局部缺血的條件下對心臟和肝臟的保護有關。【Hepatology?2000?Jan；31(1):166-72】在破骨細胞質(zhì)膜中的質(zhì)子ATP酶在骨的重吸收作用中起關鍵作用。【Drug?Discov?Today?1999?Apr；4(4):163-172】基因編碼B亞基，介導末梢腎單位的酸分泌。當此基因突變時，會導致末梢腎小管酸液過多癥，并伴有感覺神經(jīng)性耳聾。這與ATP6B1在耳蝸和內(nèi)淋巴囊中有表達的發(fā)現(xiàn)一致。保持正常的淋巴囊的pH值和正常的聽力需要活躍的質(zhì)子的分泌。【.Nature?Genet.21:84-90,1999】

由于如上所述質(zhì)子轉移ATP酶24蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的質(zhì)子轉移ATP酶24蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新質(zhì)子轉移ATP酶24蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽--質(zhì)子轉移ATP酶24以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼質(zhì)子轉移ATP酶24的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼質(zhì)子轉移ATP酶24的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)質(zhì)子轉移ATP酶24的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽--質(zhì)子轉移ATP酶24的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽--質(zhì)子轉移ATP酶24的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與質(zhì)子轉移ATP酶24異常相關的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少100％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中352-996位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1877位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細胞和回收表達產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制質(zhì)子轉移ATP酶24蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。