[發(fā)明專利]一種新的多肽——L1－12和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115143.6
• 申請日: 2000-03-27
• 公開（公告）號: CN1315332A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--L1-12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

人類主要的基因組是由一些分散在各個不同家族的重復(fù)序列所構(gòu)成的唯一的DNA序列簇組成[Kole,L.B.,aynes,S.R.,et?al.,1983,J.Mol.Biol.165,257-286]。這些分散的重復(fù)序列可以按照他們的基因型長度來分類[Singer,M.F.1982,Int.Rev.Cytol.76,113-193]。那些短的分散重復(fù)序列所組成的家族例如Alu重復(fù)子被歸為SINE家族，相應(yīng)地由長的分散重復(fù)序列所組成的家族則被歸為LINE家族。

人類長的分散重復(fù)序列LINE-1(L1)組成了一個高度重復(fù)的但缺乏長末端重復(fù)序列的DNA家族。到目前為止SINE和LINE?DNA在基因組中的功能還不是很清楚。一些L1元素在哺乳動物基因組中能調(diào)節(jié)逆轉(zhuǎn)錄倒位[Dom?bros?ki,B.A.,Scott,A.F.,et?al.,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90,6513-6517]。L1序列的特征是在3’末端富含A,5’端縮減以及含有重要意義的長的開放閱讀框。完整的L1序列長6.5kb包含兩個開放閱讀框(ORF1,ORF2)。ORF1編碼一個尚未知功能的40kDa蛋白，ORF2包含一個與逆轉(zhuǎn)錄有關(guān)的序列區(qū)域[Mathias,S.L.,Scott,A.F.,1991,Science254,1808-1810]。在已分析的所有哺乳動物中所有的L1開放閱讀框及其所編碼的相應(yīng)的肽段都同源。現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)許多實體瘤和瘤細胞系的L1具有轉(zhuǎn)錄活性[Bratthauer,G.L.,Cardiff,R.D.,etal.,1994,Cancer73,2333-2336]。L1作為轉(zhuǎn)錄子和核因子結(jié)合元素是內(nèi)部的順式作用元件[Minakami,R.,Kurose,et?al.,1992,Nucleic?Acids?Res.20,3139-3145]。這些證據(jù)表明L1蛋白的轉(zhuǎn)錄功能可能是細胞增殖所必須的。

L1DNA元素在人類基因組以及嚙齒類細胞中是常見的，但是L1轉(zhuǎn)錄子的轉(zhuǎn)錄作用卻可能是人類特異性的。因為L1轉(zhuǎn)錄子在人類細胞中大量表達，在所有人類染色體L1的逆轉(zhuǎn)錄倒位片段可能對加速DNA非正常雜交以及一些特殊的基因的染色體缺失起著非常重要的作用[Kou-Wha?Kuo,Hamm-Min?G?et?al.,1998,Biochem?Biophys?Res?Commun,253(3):566-570]。

本發(fā)明人的多肽與L1蛋白在蛋白質(zhì)水平上有82％的相同性和89％的相似性，并具有L1蛋白的特征序列，屬于L1蛋白家族，故命名為L1-12，并推測其具有相似的生物學(xué)功能。

由于如上所述L1-12蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的L1-12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新L1-12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——L1-12以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼L1-12的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼L1-12的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)L1-12的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽--L1-12的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽--L1-12的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與L1-12異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少83％相同性的多核苷酸。