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[發(fā)明專利]一種新的多肽——人dUTP焦磷酸酶13和編碼這種多肽的多核苷酸無效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 00115142.8 申請日: 2000-03-27
公開(公告)號: CN1315541A 公開(公告)日: 2001-10-03
發(fā)明(設(shè)計)人: 毛裕民;謝毅 申請(專利權(quán))人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
主分類號: C12N15/55 分類號: C12N15/55;C12N9/18;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/42;C12Q1/68;A61K38/46
代理公司: 暫無信息 代理人: 暫無信息
地址: 200092 上海市*** 國省代碼: 上海;31
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 多肽 dutp 磷酸酶 13 編碼 這種 多核苷酸
【說明書】:

發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,具體地說,本發(fā)明描述了一種新的多肽--人dUTP焦磷酸酶13,以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在生物體的DNA合成過程中,尿嘧啶(dUTP)很可能被DNA聚合酶當作dTTP被摻入到DNA鏈中,造成錯誤摻入,從而導(dǎo)致修復(fù)損傷、DNA的破碎和細胞凋亡等很多結(jié)果。

在生物合成嘧啶過程中產(chǎn)生的dUTP是dUTP焦磷酸酶的底物,dUTP焦磷酸酶的作用是催化水解dUTP,使其成為dUMP和PPi,從而控制dUTP在細胞內(nèi)的水平。(J?Mol?Biol(1999)288,275-287)

當胞內(nèi)的dUTP水平持續(xù)提高時,一連串的過程最終會導(dǎo)致?lián)p傷修復(fù)位點交迭、不可逆的DNA破碎、細胞凋亡等結(jié)果。因此,通過dUTP焦磷酸酶來控制dUTP的胞內(nèi)水平對生物體來講是不可缺少的。

根據(jù)光親和標記和定點誘變的結(jié)果,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)dUTP焦磷酸酶有一個beta-發(fā)卡結(jié)構(gòu)域(beta-hairpin?motif),以及一些有特定功能的氨基酸殘基,這些結(jié)構(gòu)域目前研究得不是很清楚,但它們被推測與dUTP焦磷酸酶的活性、dUTP焦磷酸酶與dUTP的結(jié)合等等有關(guān)。研究的結(jié)果證明,dUTP焦磷酸酶的活性和與dUTP結(jié)合的作用在很大程度上都與beta-hairpin?motif的芳香族側(cè)鏈結(jié)構(gòu)有關(guān)。(JMol?Biol(1999)288,275-287)

根據(jù)研究,葉酸鹽激動劑/拮抗劑和胸苷酸合成酶抑制劑的抗腫瘤作用都與dUTP的錯誤摻入有關(guān)。而dUTP的水平是由dUTP焦磷酸酶來調(diào)控的,因此,dUTP焦磷酸酶的活性是化學(xué)治療和抗反向病毒治療的關(guān)鍵。(J?Mol?Biol(1999)288,275-287)

研究還發(fā)現(xiàn),dUTP焦磷酸酶在肺癌、結(jié)腸癌等病人的組織內(nèi)表達量特別低,因此,可以利用這些疾病對dUTP焦磷酸酶抑制劑的極度敏感而使其得以治療。

特別要提及的是,人內(nèi)生反向病毒(HERV)編碼的一種dUTP焦磷酸酶,已被推測為HIV感染的協(xié)助成分,因此,它也是抑制HIV感染的有效靶蛋白。(J?MolBiol(1999)288,275-287)

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn),在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中,本發(fā)明的多肽的表達譜與人dUTP焦磷酸酶26的表達譜非常近似,因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人dUTP焦磷酸酶13。

由于如上所述人dUTP焦磷酸酶13蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用,而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白,因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人dUTP焦磷酸酶13蛋白,特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人dUTP焦磷酸酶13蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ),因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽--人dUTP焦磷酸酶13以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人dUTP焦磷酸酶13的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人dUTP焦磷酸酶13的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人dUTP焦磷酸酶13的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽--人dUTP焦磷酸酶13的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽--人dUTP焦磷酸酶13的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人dUTP焦磷酸酶13異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽,該多肽是人源的,它包含:具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地,該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸,它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體:

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸;

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸;

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70%相同性的多核苷酸。

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