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[發明專利]一種新的多肽——人dUTP焦磷酸酶13和編碼這種多肽的多核苷酸無效

專利信息
申請號: 00115142.8 申請日: 2000-03-27
公開(公告)號: CN1315541A 公開(公告)日: 2001-10-03
發明(設計)人: 毛裕民;謝毅 申請(專利權)人: 上海博德基因開發有限公司
主分類號: C12N15/55 分類號: C12N15/55;C12N9/18;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/42;C12Q1/68;A61K38/46
代理公司: 暫無信息 代理人: 暫無信息
地址: 200092 上海市*** 國省代碼: 上海;31
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 多肽 dutp 磷酸酶 13 編碼 這種 多核苷酸
【說明書】:

發明屬于生物技術領域,具體地說,本發明描述了一種新的多肽--人dUTP焦磷酸酶13,以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在生物體的DNA合成過程中,尿嘧啶(dUTP)很可能被DNA聚合酶當作dTTP被摻入到DNA鏈中,造成錯誤摻入,從而導致修復損傷、DNA的破碎和細胞凋亡等很多結果。

在生物合成嘧啶過程中產生的dUTP是dUTP焦磷酸酶的底物,dUTP焦磷酸酶的作用是催化水解dUTP,使其成為dUMP和PPi,從而控制dUTP在細胞內的水平。(J?Mol?Biol(1999)288,275-287)

當胞內的dUTP水平持續提高時,一連串的過程最終會導致損傷修復位點交迭、不可逆的DNA破碎、細胞凋亡等結果。因此,通過dUTP焦磷酸酶來控制dUTP的胞內水平對生物體來講是不可缺少的。

根據光親和標記和定點誘變的結果,已經發現dUTP焦磷酸酶有一個beta-發卡結構域(beta-hairpin?motif),以及一些有特定功能的氨基酸殘基,這些結構域目前研究得不是很清楚,但它們被推測與dUTP焦磷酸酶的活性、dUTP焦磷酸酶與dUTP的結合等等有關。研究的結果證明,dUTP焦磷酸酶的活性和與dUTP結合的作用在很大程度上都與beta-hairpin?motif的芳香族側鏈結構有關。(JMol?Biol(1999)288,275-287)

根據研究,葉酸鹽激動劑/拮抗劑和胸苷酸合成酶抑制劑的抗腫瘤作用都與dUTP的錯誤摻入有關。而dUTP的水平是由dUTP焦磷酸酶來調控的,因此,dUTP焦磷酸酶的活性是化學治療和抗反向病毒治療的關鍵。(J?Mol?Biol(1999)288,275-287)

研究還發現,dUTP焦磷酸酶在肺癌、結腸癌等病人的組織內表達量特別低,因此,可以利用這些疾病對dUTP焦磷酸酶抑制劑的極度敏感而使其得以治療。

特別要提及的是,人內生反向病毒(HERV)編碼的一種dUTP焦磷酸酶,已被推測為HIV感染的協助成分,因此,它也是抑制HIV感染的有效靶蛋白。(J?MolBiol(1999)288,275-287)

通過基因芯片的分析發現,在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中,本發明的多肽的表達譜與人dUTP焦磷酸酶26的表達譜非常近似,因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人dUTP焦磷酸酶13。

由于如上所述人dUTP焦磷酸酶13蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用,而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白,因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人dUTP焦磷酸酶13蛋白,特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人dUTP焦磷酸酶13蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎,因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人dUTP焦磷酸酶13以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人dUTP焦磷酸酶13的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人dUTP焦磷酸酶13的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人dUTP焦磷酸酶13的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人dUTP焦磷酸酶13的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人dUTP焦磷酸酶13的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人dUTP焦磷酸酶13異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽,該多肽是人源的,它包含:具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地,該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸,它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體:

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸;

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸;

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70%相同性的多核苷酸。

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