[發(fā)明專利]一種新的多肽——人二氫乳清酸酶40和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00115126.6
• 申請(qǐng)日: 2000-03-24
• 公開（公告）號(hào): CN1315576A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/60
• 分類號(hào): C12N15/60;C12N9/88;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/527;C12Q1/68;A61K38/51
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽－－人二氫乳清酸酶40，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

二氫乳清酸酶(DHOase)，又稱為氨甲酰天冬氨酸脫水酶，催化嘧啶生物合成的第三階段的從頭開始，使脲基琥珀酸(N-氨基甲酰-L-天冬氨酸)轉(zhuǎn)化為二氫乳清酸。二氫乳清酸酶是極少數(shù)不用直接偶聯(lián)例如ATP之類的能量即可生物合成一個(gè)氨基鍵催化反應(yīng)的酶之一，催化了N-氨基甲酰-L-天冬氨酸的環(huán)化，這個(gè)催化反應(yīng)還結(jié)合一個(gè)催化活性所必須的鋅原子。

在細(xì)菌中，二氫乳清酸酶是由兩條同樣的400個(gè)氨基酸殘基左右的長(zhǎng)鏈組成的二聚物；在更高的真核生物中，二氫乳清酸酶是一個(gè)有多種功能的大蛋白的一部分；在果蠅、哺乳類中，它催化嘧啶生物合成的前三步。二氫乳清酸酶位于這個(gè)多聚蛋白的中心。在酵母中，二氫乳清酸酶由單功能蛋白基因(URA4)編碼。然而，一個(gè)二氫乳清酸酶突變株發(fā)現(xiàn)了由多功能蛋白基因(URA2)編碼，催化嘧啶合成的前兩步。

有些代謝途徑幾乎在所有的器官中普遍存在，編碼催化這些途徑的酶的基因一定是古老的、重要的。嘧啶生物合成的從頭開始途徑就是這樣一個(gè)例子。比較不同來源的二氫乳清酸酶氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)高度保守序列。一個(gè)在N末端，含有兩個(gè)組氨酸殘基，被認(rèn)為與結(jié)合鋅原子有關(guān)；另一個(gè)在C-末端。我們建立了這兩個(gè)區(qū)域信號(hào)模式。N末端的保守序列：D-[LIVMFYWSAP]-H-[LIVA]-H-[LIVF]-[RN]-x-[PGN]，其中，兩個(gè)H可能是鋅配位體的位點(diǎn)。C末端的保守序列：[GA]-[ST]-D-x-A-P-H-x(4)-K，適用除尿囊素酶以外的所有與二氫乳清酸酶有關(guān)酶。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時(shí)的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時(shí)的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人二氫乳清酸酶10的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人二氫乳清酸酶40。

由于如上所述人二氫乳清酸酶40蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人二氫乳清酸酶40蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人二氫乳清酸酶40蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽－－人二氫乳清酸酶40以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人二氫乳清酸酶40的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人二氫乳清酸酶40的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人二氫乳清酸酶40的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽－－人二氫乳清酸酶40的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽－－人二氫乳清酸酶40的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人二氫乳清酸酶40異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中18-1121位的序列；和(b)具有SPQ?ID?NO:1中1-1688位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。