[發明專利]一種新的多肽——微管蛋白輔助因子9和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00115101.0
• 申請日: 2000-03-24
• 公開（公告）號: CN1315329A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——微管蛋白輔助因子9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

主動運動是一切生命體最顯著的特征之一。作為生物體基本單位的細胞，其多中多樣的生理活動，如細胞形態的改變和維持、細胞內物質運輸、內吞外排、免疫行為、細胞分裂等，無不伴隨著各種形式的運動。細胞中的骨架系統是這種運動的基礎。細胞骨架分為三種類型的蛋白質纖維：微絲、微管和中等纖維。

微管是真核細胞作獨有并普遍存在的結構。在不同類型的細胞中微管具有相同的形態。大多數微管見于細胞質基質內，然而它們又是纖毛、鞭毛等運動器官完整組成的一部分，同時也是中心粒的組成部分。另外，微管在神經細胞內物質運輸中起到了重要的作用。許多的軸突營養物質，如小泡、蛋白質顆粒、肌動蛋白、包涵素、鈣調蛋白和其他代謝酶類等都是通過微管運輸的。除此以外，在細胞分裂時，染色體在赤道板上的排列以及向兩極的運動的動力也來源于微管蛋白的不斷的聚合以及解聚。

微管是由管蛋白和少量微管結合蛋白的聚合作用而形成的。微管蛋白是異源二聚體，由α和β亞基構成。這兩種亞基都是GTP結合蛋白。其中α亞基與GTP的結合是不可交換的，而β亞基的GTP結合部位則是可交換的。GTP被β微管蛋白的水解是微管動態行為的關鍵因素。GTP的水解與微管蛋白的聚合相耦連，由GTP結合微管蛋白形成的微管的帽狀部位的大小變化決定了該微管是繼續伸長還是進入迅速解聚的狀態。

GTP水解對微管蛋白的本地合成也是至關重要的。對微管蛋白折疊通路的研究表明，在α和β多肽鏈到達本地合成位置以前必須與一系列分子伴娘蛋白相互作用。這一通路的第一步是將新合成的(或變性的)微管蛋白分子與細胞質分子伴娘結合(稱為TriC和CCT)。經過一輪或幾輪的胞質分子伴娘水解ATP反應產生的半本地化微管蛋白中間體與微管特異的分子伴娘(輔助因子A-E)相互作用。之后形成一個超復合物，包含α、β微管蛋白和輔助因子C、D和E，最后本地化的微管蛋白從這個超復合物中被釋放出來。在這個過程中需要GTP的水解反應。【J?Biol?Chem?1999?Aug?20；274(34):24054-8】

在微管蛋白的折疊過程中，各個輔助因子所起的作用是不同的。輔助因子A和D將β微管蛋白捕獲并且使之在半本地化的構象中維持穩定。輔助因子E與輔助因子D-β微管蛋白復合物相結合，與輔助因子C結合之后將本地化的β微管蛋白釋放到胞質中。【Cell?1996?Jul?26；86(2):287-96】

由此可見，微管蛋白的正確折疊離不開輔助因子。當輔助因子發生突變的時候，微管就不能正確合成，從而導致微管功能的缺陷而產生各種后果。輔助因子的突變而產生的微管功能的缺陷已經在輔助因子D和E的突變酵母中發現了。【Cell?1996?Jul?26；86(2):287-96】

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中，本發明的多肽的表達譜與微管蛋白輔助因子C的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為微管蛋白輔助因子9。

由于如上所述微管蛋白輔助因子9蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的微管蛋白輔助因子9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新微管蛋白輔助因子9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——微管蛋白輔助因子9以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼微管蛋白輔助因子9的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼微管蛋白輔助因子9的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產微管蛋白輔助因子9的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——微管蛋白輔助因子9的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——微管蛋白輔助因子9的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與微管蛋白輔助因子9異常相關的疾病的方法。