[發明專利]新的人γ－丁酰甜菜堿羥化酶及其編碼序列

無效

• 申請號: 00115001.4
• 申請日: 2000-03-20
• 公開（公告）號: CN1314471A
• 公開（公告）日: 2001-09-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海生元基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所
• 代理人: 徐申民

本發明屬于生物技術領域和遺傳工程領域，具體地說，本發明涉及了一種新的多肽-人γ-丁酰甜菜堿羥化酶(Novel?Human?gamma-butyrobetaine?hydroxylase，簡稱“BioBBH”)，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

大多數動物能自身合成L-肉堿，在特定情況下適量補充L-肉堿有利于彌補肉堿合成酶活性不足、代謝失常、營養不良等情況，有利于降低肌肉和肝臟的脂肪含量。從賴氨酸和蛋氨酸合成為肉堿的生物合成路徑中有五個酶反應步驟。γ-丁酰甜菜堿羥化酶是L-肉堿生物合成路徑的最后一個催化酶，它催化γ-丁酰甜菜堿到L-肉堿，這一羥化反應依賴于α-酮戊二酸鹽，Fe²⁺和氧。它在鼠類的腎中表達量較高，在肝臟中表達量中等，在腦中表達量較低，在其他一些器官中未檢測到有表達[Vaz?FM,et?al.,Biochem?Biophys?Res?Commun1998；250:506-10]。

肉堿的合成在肝臟的過氧化物酶體的增殖中是必要的。當過氧化物酶體的增殖受降固醇酸誘導時，肝臟的γ-丁酰甜菜堿羥化酶活性會迅速增加[Paul?HS,et?al.,Eur?J?Biochem1992；203:599-605]。

研究發現，人γ-丁酰甜菜堿羥化酶及其編碼的多核苷酸與人體免疫系統紊亂、癌癥等疾病有關。因此，為治療目的研究和開發人γ-丁酰甜菜堿羥化酶有重要意義。本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人γ-丁酰甜菜堿羥化酶(簡稱為“BioBBH”)以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該BioBBH多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼BioBBH的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼BioBBH的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產BioBBH的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的BioBBH多肽的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明BioBBH多肽的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷和治療與BioBBH異常相關的疾病的方法。

在本發明的第一方面，提供新穎的分離出的人γ-丁酰甜菜堿羥化酶(BioBBH)，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、類似物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽或其氨基酸變異不超過5％的衍生物。

在本發明的第二方面，提供分離的編碼這些多肽的多核苷酸，該多核苷酸包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少70％相同性：(a)編碼上述BioBBH的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼具有SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中126-1391位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1695位的序列。

在本發明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉化或轉導的宿主細胞或者被上述多核苷酸直接轉化或轉導的宿主細胞。

本發明的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。

下列附圖用于說明本發明的具體實施方案，而不用于限定由權利要求書所界定的本

發明范圍。

圖1是本發明的人γ-丁酰甜菜堿羥化酶(BioBBH)和Caenorhabditis?elegans的γ-丁酰甜菜堿羥化酶(Z66523)的氨基酸序列同源性比較圖。相同氨基酸在兩個序列間用單字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。圖2為分離的人γ-丁酰甜菜堿羥化酶(BioBBH)的聚丙烯酰胺凝膠電泳圖(SDS-PAGE)。46kDa為蛋白質的分子量，箭頭所指為分離出的蛋白條帶。

如本發明所用，“分離的”是指物質從其原始環境中分離出來(如果是天然的物質，原始環境即是天然環境)。例如，活體細胞內的天然狀態下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態中同存在的其他物質中分開，則為分離純化的。