[發明專利]一種新的多肽——人線粒體ATPase耦合因子6－10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00114976.8
• 申請日: 2000-03-17
• 公開（公告）號: CN1314367A
• 公開（公告）日: 2001-09-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人線粒體ATPase耦合因子6-10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

線粒體是真核細胞內一種重要的獨特的細胞器，是細胞內的“動力站”。線粒體通過氧化磷酸化作用，進行一系列的能量轉換，產生出大量ATP，提供細胞進行各種生命活動所需要的能量。電子從NADH傳遞到氧的過程中所釋放的能量是ADP耦聯磷酸化生成ATP的能量直接來源。在線粒體內，氧化和磷酸化同時進行并且密切地耦聯在一起，其中的耦聯因子是一些小顆粒，位于線粒體內膜的基質側，其主要功能是使電子傳遞和磷酸化作用和諧地進行。線粒體ATPase耦聯因子6(mitochondrial?ATPase?coupling?factor6)是線粒體ATP酶復合物的成員之一，是催化反應中交互作用所必須的組分。

目前已經分離得到人胎兒中的一種編碼耦聯因子6蛋白前體的cDNA，這段長度為497bp的cDNA包含一個96bp的區段，專門編碼前體蛋白(含有108個氨基酸殘基)中的前端32個氨基酸，該肽段可以作為信號肽起作用；在前體蛋白的3’-末端還存在一個140bp的區段，是非翻譯區，其余的cDNA序列則編碼成熟的含有76個氨基酸殘基的耦聯因子6蛋白(Javed?AA,Ogata?K,Sanadi?DR)。在各種哺乳動物中，線粒體ATPase耦聯因子6的氨基酸序列是非常保守的。

線粒體ATPase耦聯因子6是一種親水性的蛋白，并且它的親水性側面在不同動物體中表現出非常相似的特征。寡霉素敏感性授予蛋白(Oligomycinsensitivity?conferral?protein)，在缺少耦聯因子6的情況下，能夠結合ATP酶到達線粒體的膜上，其表觀締合濃度為10(6)M-1，而結合了耦聯因子6以后，獲得的ATP酶的締合濃度下降了1-2個數量級。寡霉素敏感性授予蛋白對魯塔霉素敏感，而耦聯因子6依賴的膜結合的ATP酶活性對于魯塔霉素并不敏感。(Liang?AM,Fisher?RJ)。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中，本發明的多肽的表達譜與人線粒體ATPase耦合因子6的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人線粒體ATPase耦合因子6-10。

由于如上所述人線粒體ATPase耦合因子6-10蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人線粒體ATPase耦合因子6-10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人線粒體ATPase耦合因子6-10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人線粒體ATPase耦合因子6-10以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人線粒體ATPase耦合因子6-10的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人線粒體ATPase耦合因子6-10的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人線粒體ATPase耦合因子6-10的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人線粒體ATPase耦合因子6-10的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人線粒體ATPase耦合因子6-10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人線粒體ATPase耦合因子6-10異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。