[發明專利]一種新的人肌動蛋白相關蛋白及其編碼序列

無效

• 申請號: 00114964.4
• 申請日: 2000-03-17
• 公開（公告）號: CN1269414A
• 公開（公告）日: 2000-10-11
• 發明（設計）人: 李月彬;顧彥杰;宋懷東;高國鋒;彭永德;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛

本發明涉及分子生物學、蛋白學、生理學以及基因工程等領域。具體地，本發明涉及一種在人類嗜鉻細胞瘤中表達的hArp-d蛋白及其核酸序列。本發明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

肌動蛋白和肌球蛋白一起構成了高等動物的肌肉組織。而在多數高等生物中都發現了大量只與肌動蛋白同源卻又不同與常見肌動蛋白的蛋白質，統稱為肌動蛋白相關蛋白(actin-related?proteins，Arps)。(J?Mol?Biol?1994?Jan?28；235(4)：1351-6)。Arps以不同的形式參與細胞內的多種進程：例如調節常規肌動蛋白的裝配、協助動力蛋白催化微管系統、甚至作為蛋白復合物的成分調節基因表達。(AnnuRev?Cell?Dev?Biol?1999；15：341-63)。

本發明中，我們在人類嗜鉻細胞瘤中克隆到果蠅(Drosophila?melanogaster)的肌動蛋白相關蛋白Arp-d基因的同源基因hArp-d。

在本發明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hArp-d蛋白序列及其核酸序列。

本發明的第一目的就是提供一種新的人基因hArp-d(Genbank?AccessionNo.AF212251)，該基因是一個人hArp-d蛋白基因。

本發明的第二目的是提供一種新的人蛋白hArp-d。

本發明的第三目的是提供一種利用重組技術生產上述的新的人hArp-d蛋白和核酸序列的方法。

本發明還提供了這種人hArp-d蛋白多肽和編碼序列的應用。

在本發明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hArp-d蛋白質活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第44-1234位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第44-1234位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第44-1234位的核苷酸序列。

在本發明的另一方面，提供了一種分離出的人hArp-d蛋白質多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.7序列的多肽。

在本發明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞。在一個實例中該宿主細胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細胞是真核細胞。

在本發明的另一方面，還提供了一種產生具有人hArp-d蛋白質活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有人hArp-d蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成人hArp-d蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第44-1234位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞，形成人hArp-d蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達人hArp-d蛋白多肽的條件下，培養步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有人hArp-d蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.6中第44-1234位的序列。

本發明還提供了與hArp-d蛋白多肽特異性結合的抗體。

在本發明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態下位于其兩側的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經與天然狀態下伴隨核酸的組份分開，而且已經與在細胞中伴隨其的蛋白質分開。