[發(fā)明專利]一種新的人二酰甘油焦磷酸鹽磷酸酶蛋白及其編碼序列

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00114952.0
• 申請日: 2000-03-17
• 公開（公告）號: CN1271009A
• 公開（公告）日: 2000-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李能干;肖華勝;劉鋒;宋懷東;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權(quán)）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 復(fù)旦大學(xué)專利事務(wù)所
• 代理人: 陸飛

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、酶學(xué)、生理學(xué)以及基因工程等領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種在人類肝癌旁組織中表達(dá)的hDPP蛋白及其核酸序列。本發(fā)明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

二酰甘油焦磷酸鹽磷酸酶(Diacylglycerol?pyrophosphate?phosphatase，DPP)是一種膜聯(lián)合酶。它的作用是將二酰甘油焦磷酸鹽(Diacylglycerol?pyro-phosphate，DGPP)中的beta磷酸根去掉，從而生成磷酸酯。一般DPP在脂類信號傳導(dǎo)及細(xì)胞代謝中起作用。(Biochemistry?1999?Nov?2；38(44)：14606-13)；(J?BiolChem?1998?Feb?6；273(6)：3278-84)。

本發(fā)明中，我們在人類肝癌旁組織中克隆到Saccharomyces?cerevisiaeDPP1基因的同源基因hDPP。

在本發(fā)明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hDPP蛋白序列及其核酸序列。

本發(fā)明的第一目的就是提供一種新的人基因hDPP(Genbank?AccessionNo.AF212238)，該基因是一個人hDPP蛋白基因。

本發(fā)明的第二目的是提供一種新的人蛋白hDPP。

本發(fā)明的第三目的是提供一種利用重組技術(shù)生產(chǎn)上述的新的人hDPP蛋白和核酸序列的方法。

本發(fā)明還提供了這種人hDPP蛋白多肽和編碼序列的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hDPP蛋白質(zhì)活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第27-554位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴(yán)緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第27-554位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第27-554位的核苷酸序列。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種分離出的人hDPP蛋白質(zhì)多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.7序列的多肽。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。在一個實例中該宿主細(xì)胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種產(chǎn)生具有人hDPP蛋白質(zhì)活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有人hDPP蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達(dá)調(diào)控序列，形成人hDPP蛋白表達(dá)載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第27-554位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，形成人hDPP蛋白的重組細(xì)胞；

(3)在適合表達(dá)人hDPP蛋白多肽的條件下，培養(yǎng)步驟(2)中的重組細(xì)胞；

(4)分離出具有人hDPP蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.6中第27-554位的序列。

本發(fā)明還提供了與hDPP蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。

在本發(fā)明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態(tài)下位于其兩側(cè)的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經(jīng)與天然狀態(tài)下伴隨核酸的組份分開，而且已經(jīng)與在細(xì)胞中伴隨其的蛋白質(zhì)分開。

在本發(fā)明中，術(shù)語“人hDPP蛋白(或多肽)編碼序列”指編碼具有人hDPP蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ?ID?NO.6中第27-554位核苷酸序列及其簡并序列。該簡并序列是指，位于SEQ?ID?NO.6序列的編碼框第27-554位核苷酸中，有一個或多個密碼子被編碼相同氨基酸的簡并密碼子所取代后而產(chǎn)生的序列。由于密碼子的簡并性，所以與SEQ?ID?NO.6中第27-554位核苷酸序列同源性低至約70％的簡并序列也能編碼出SEQ?ID?NO.7所述的序列。該術(shù)語還包括能在中度嚴(yán)緊條件下，更佳的在高度嚴(yán)緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第27-554位的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。該術(shù)語還包括與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第27-554位的核苷酸序列的同源性至少70％，較佳地至少80％，更佳地至少90％，最佳地至少95％的核苷酸序列。