[發明專利]一種新的人耐鹽蛋白亞基蛋白及其編碼序列

無效

• 申請號: 00114951.2
• 申請日: 2000-03-17
• 公開（公告）號: CN1271008A
• 公開（公告）日: 2000-10-25
• 發明（設計）人: 李能干;肖華勝;劉鋒;宋懷東;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛

本發明涉及分子生物學、生理學以及基因工程等領域。具體地，本發明涉及一種在人類造血干細胞中表達的hHAL-a蛋白及其核酸序列。本發明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

多種微生物能夠適應很大范圍的鹽(NaCl)濃度環境，某些低等生物更是能夠在高鹽環境下繼續它們的生命活動。一般而言，這樣的適應性有如下幾種機理：細胞壁是通透性的，離子自由出入可保持平衡；或者細胞質內濃縮某些對機體不產生負面影響的溶質以維持滲透壓平衡；或者細胞本身生理性的控制水分子出入細胞壁從而使細胞能夠在內環境離子濃度較稀的情況下生存。(Crit?Rev?Microbiol?1987；14(4)：311-56)。研究發現，微生物體內耐鹽蛋白(halotolerance?protein，HAL)的存在使得它們對高鹽環境的適應能力大大加強了。而進一步的研究發現，耐鹽蛋白還參與了絲氨酸/蘇氨酸殘基的蛋白磷酸化。(Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A?1998?Jun23；95(13)：7357-62)。

本發明中，我們在人類造血干細胞中克隆到Arabidopsis?thalianaHAL3A基因的同源基因hHAL-a。

在本發明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hHAL-a蛋白序列及其核酸序列。

本發明的第一目的就是提供一種新的人基因hHAL-a(Genbank?AccessionNo.AF182419)，該基因是一個人hHAL-a蛋白基因。

本發明的第二目的是提供一種新的人蛋白hHAL-a。

本發明的第三目的是提供一種利用重組技術生產上述的新的人hHAL-a蛋白和核酸序列的方法。

本發明還提供了這種人hHAL-a蛋白多肽和編碼序列的應用。

在本發明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hHAL-a蛋白質活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第60-443位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第60-443位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第60-443位的核苷酸序列。

在本發明的另一方面，提供了一種分離出的人hHAL-a蛋白質多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.7序列的多肽。

在本發明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞。在一個實例中該宿主細胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細胞是真核細胞。

在本發明的另一方面，還提供了一種產生具有人hHAL-a蛋白質活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有人hHAL-a蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成人hHAL-a蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第60-443位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞，形成人hHAL-a蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達人hHAL-a蛋白多肽的條件下，培養步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有人hHAL-a蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.6中第60-443位的序列。

本發明還提供了與hHAL-a蛋白多肽特異性結合的抗體。

在本發明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態下位于其兩側的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經與天然狀態下伴隨核酸的組份分開，而且已經與在細胞中伴隨其的蛋白質分開。