[發明專利]一種新的多肽——人脂肪氧化酶9和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00114912.1
• 申請日: 2000-03-15
• 公開（公告）號: CN1313389A
• 公開（公告）日: 2001-09-19
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人脂肪氧化酶9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

脂類包含有很多不同種類的化合物，它們具有以下幾種生物學功能：(1)在所有細胞中，膜的主要結構成分為脂類；(2)有些脂類能有效的儲存能量；(3)動物中發現的很多維生素和激素是脂類或脂類的衍生物；(4)在消化時，膽汁酸有助于溶解其他脂類。

花生四烯酸是大多數哺乳動物主要的C₂₀多聚不飽和脂肪酸，它可以通過酶的催化變為很多種化合物，例如，前列腺素、凝血惡烷和白三烯等。在上述的催化過程中，脂肪氧化酶起到了重要的作用。

脂肪氧化酶是一類鐵原子結合的雙加氧酶，它可以催化脂類的氫過氧化作用，它的催化底物除了花生四烯酸外，還包括順，順-1,4-戊二烯等等。脂肪氧化酶對于脂類的氧化作用有著重要的催化功能，因此對于脂類的代謝、脂類及其衍生物的生理學功能的發揮等都有極其重要的意義。

編碼大豆脂肪氧化酶的基因的核苷酸序列已被得到，大豆的脂肪氧化酶已經發現的有三種，LOX1,LOX2,LOX3。雖然它們在核苷酸序列上有差異，但是它們都具有一個大約為40個氨基酸殘基的保守序列，此保守序列含有6個組氨酸和2個酪氨酸，這個保守的序列在大豆的三種脂肪氧化酶中是高度保守的，并被推測與可能的鐵原子結合有關。(J?Biol?Chem?1988?May?15；263(14):6816-21)

對脂肪氧化酶的結構研究發現，脂肪氧化酶結合的鐵原子由四個配基結合，其中三個是組氨酸殘基。所有的脂肪氧化酶都具有6個組氨酸殘基，其中5個集中在大約為40個氨基酸的區域內(這個區域包括了兩個鋅指結合配基)，另一個組氨酸被證明對于脂肪氧化酶的活性有重要作用。(Boyington?J.C.,Gaffney?B.J.,Amzel?L.M.Science?260:1482-1486(1993))；(Steczko?J.,Donoho?G.P.,ClemensJ.C.,Dixon?J.E.,Axelrod?B.Biochemistry?31:4053-4057(1992))

在植物中，脂肪氧化酶的作用是與植物的很多生理學過程，例如生長、發育、抗病蟲害和損傷修復有關。(Vick?B.A.,Zimmerman?D.C.(In)Biochemistry?ofplants:A?comprehensive?treatise,Stumpf?P.K.,Ed.,Vol.9,pp.53-90,Academic?Press,New-York,(1987))

白三烯是一種極強的肌肉收縮劑，它能使肺氣管有所縮小，從而對于哮喘的治療有重要意義，此外，白三烯在白細胞和肥大細胞腫瘤細胞中均有發現。前列腺素和凝血惡烷的作用機理還不是很清楚，但它們對于血液凝固、腺苷酸環化酶的活化等過程有著重要的作用。根據對很多哺乳動物的研究，脂肪氧化酶與前列腺素、凝血惡烷和白三烯等物質的新陳代謝有關，因此，脂肪氧化酶可以調控上述的一些重要的生理過程。(Needleman?P.,Turk?J.,Jakschik?B.A.,MorrisonA.R.,Lefkowith?J.B.Annu.Rev.Biochem.55:69-102(1986))

進一步研究還發現，人脂肪氧化酶催化從花生四烯酸到白三烯生成途徑的前兩步，從而對于生物花生四烯酸的代謝有著重要影響，由此可以間接的調控人的炎癥和過敏性疾病。(Proc?Natl?Acad?Sci?USA?1988?Jan；85(2):416-20)

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中，本發明的多肽的表達譜與人脂肪氧化酶10的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人脂肪氧化酶9。

由于如上所述人脂肪氧化酶9蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人脂肪氧化酶9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人脂肪氧化酶9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人脂肪氧化酶9以及其片段、類似物和衍生物。