[發(fā)明專利]一種抗稻瘟病水稻育種材料的選育方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00114616.5
• 申請(qǐng)日: 2000-06-05
• 公開（公告）號(hào): CN1326671A
• 公開（公告）日: 2001-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳葆棠;張端品;余毓君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H1/02
• 分類號(hào): A01H1/02
• 代理公司: 北京農(nóng)林水專利代理有限公司
• 代理人: 張紅兵

本發(fā)明屬于農(nóng)作物新品種新材料的創(chuàng)造方法范疇，其國(guó)際專利分類號(hào)為A01H1/02。

在我國(guó)稻作區(qū)發(fā)生的水稻病害中，稻瘟病是影響水稻高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的主要病害之一。水稻病害綜合防治實(shí)踐證明，進(jìn)行水稻品種抗稻瘟病的遺傳改良是防治稻瘟病最經(jīng)濟(jì)有效的途徑。稻瘟病是由病原物Pyricularia?grisea引起的真菌性病害，它可以通過突變等多種方式產(chǎn)生致病性的變異。所以，生產(chǎn)上新推廣的抗病品種一般在三五年內(nèi)便喪失其專化抗性，往往是育出新抗性品種的速度趕不上病原菌致病性的變化速度。具有持久抗性的稻瘟病抗源的應(yīng)用將為克服水稻品種抗稻瘟病性的喪失帶來(lái)契機(jī)。國(guó)內(nèi)外對(duì)持久抗稻瘟病水稻品種的鑒定結(jié)果表明：持久抗性品種在適于病害發(fā)生流行的環(huán)境條件下，能保持其抗病性長(zhǎng)達(dá)幾十年之久。國(guó)內(nèi)外的研究證明，欲育成高抗且持久的抗病品種，首先需要有優(yōu)異的抗源。野生稻的許多重要的農(nóng)藝形狀，如持久抗稻瘟病性，可以在水稻的育種上得到應(yīng)用。但是，由于生殖及遺傳的隔離，野生稻與栽培稻之間的遺傳交流是很困難的，這給野生稻在育種上的應(yīng)用造成了障礙。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，打破野生稻與栽培稻間的隔離，從而使它們之間實(shí)現(xiàn)遺傳交流已成為可能。我國(guó)科學(xué)家丁穎于1929年應(yīng)用雜交法就得到了普通野生稻(O.rufipogon)和栽培稻之間的雜種，并從中選育得到品種中山1號(hào)，在生產(chǎn)中得到大面積的推廣應(yīng)用(林世成，閔紹楷主編，1971，中國(guó)水稻品種及其系譜，上海科學(xué)技術(shù)出版社，P254-256)。國(guó)際水稻研究所(IRRI)的科學(xué)家曾得到尼瓦拉野生稻(O.nivana)和栽培稻間的雜種，并培育出抗草矮病的系列品種(KushGS，Disease?and?insect?resistance?in?rice，1977，Adv?Agron，29：265-341)。1990年人們又將藥用野生稻(O.officinalis)中抗稻飛虱的特性轉(zhuǎn)移到了栽培稻中(JenaKK?et?al，Introgression?of?genes?from?Oryza?officinalis?wall?ex?watt?to?cultivated?riceOryza?sativa?L.，Theor?Appl?Genet?80：737-745)。之后，我國(guó)學(xué)者又將緊穗野生稻(O.eichingeri)中抗稻飛虱的特性轉(zhuǎn)移到了栽培稻中(顏輝煌等，1997，緊穗野生稻的褐飛虱抗性導(dǎo)入栽培稻的研究，遺傳學(xué)報(bào)，24(5)：424-431)。

以前，為選育持久抗稻瘟病的品種，人們多采用聚合育種和抗瘟基因累加等育種方法。但至今尚未有滿意的持久抗瘟材料被創(chuàng)造出來(lái)。究其原因，是因?yàn)槌志每刮列允且粋€(gè)復(fù)雜的性狀，其涉及到主效及微效兩大抗性系統(tǒng)，僅從單方面著手是很難達(dá)到目的的。小粒野生稻(O.minuta)的染色體組為AACC。小粒野生稻對(duì)稻瘟病表現(xiàn)出持久抗性，同時(shí)對(duì)白葉枯病也具有抗性。由于生殖隔離，現(xiàn)有的常規(guī)育種方法是很難將小粒野生稻和栽培稻的遺傳基礎(chǔ)結(jié)合到一塊的。本發(fā)明采用小粒野生稻作為抗源，并采用細(xì)胞工程技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法，將小粒野生稻的持久抗性遺傳機(jī)制(主效及微效)轉(zhuǎn)移到栽培稻中。

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出一種選育抗稻瘟病水稻育種材料的方法，以提高稻瘟病抗性育種的效率。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案實(shí)施：以小粒野生稻為母本，栽培稻為父本進(jìn)行有性雜交，取雜交后16—18天的幼胚置于添加有0.3—6g/l絡(luò)合鍺和20—50g/l蔗糖的MS培養(yǎng)基，以胚乳作看護(hù)培養(yǎng)，再生植株，之后在田間用栽培稻回交4—6代，所獲得的雜種植株以稻瘟病菌株接種鑒定，并進(jìn)行DNA指紋分析，最后獲得抗稻瘟病水稻的育種材料。

本發(fā)明的具體細(xì)節(jié)是：以小粒野生稻為母本，栽培稻為父本，進(jìn)行有性雜交。取雜交后16-18天的幼胚于培養(yǎng)基(通用培養(yǎng)基+0.5mg/L2，4-D+1mg/L萘乙酸+1mg/L激動(dòng)素+10ml/L水解酪蛋白.+0.5-5g/L絡(luò)合鍺+20-50g/L蔗糖.)上進(jìn)行培養(yǎng)，并進(jìn)行植株再生。分化出的幼苗在無(wú)激素的通用培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。幼苗長(zhǎng)到10厘米高時(shí)移栽到土壤中，采用抗性基因擬合(RGA)引物CLLR進(jìn)行DNA的擴(kuò)增，鑒定真假雜種。用栽培稻和真雜種進(jìn)行回交。在回交過程中，采用抗性基因擬合(RGA)引物CLLR進(jìn)行DNA指紋分析，并采用廣譜稻瘟病實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)當(dāng)選植株進(jìn)行接種鑒定。回交進(jìn)行4-6次。