[發明專利]一種測定飼料蛋白質和氨基酸消化率的體外透析管方法

無效

• 申請號: 00114535.5
• 申請日: 2000-04-29
• 公開（公告）號: CN1321775A
• 公開（公告）日: 2001-11-14
• 發明（設計）人: 黃瑞林;譚支良;李鐵軍;潘亞非
• 申請（專利權）人: 中國科學院長沙農業現代化研究所
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37
• 代理公司: 武漢科宏專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

本發明涉及一種測定飼料營養物質消化率的方法，更具體涉及一種測定飼料蛋白質和氨基酸消化率的體外透析管方法。

飼料的蛋白質和氨基酸消化率是評價單胃動物飼料營養價值最為重要的指標之一。傳統的用實驗動物進行的消化代謝試驗測定飼料蛋白質和氨基酸消化率結果雖然直觀可靠，但是十分繁瑣并耗資曠時。因此，尋求以體外試驗方法來估測蛋白質和氨基酸消化率，并以此評價飼料的營養價值就顯得十分必要。日本學者Furuya等創立了用胃蛋白酶和豬小腸液離體培養測定飼料消化率的方法，我國學者張子儀等將該方法成功地用于雞、豬飼料代謝能、消化能等測定。這些方法的整個反應均在封閉容器中進行，酶促反應的產物不能及時轉移，與動物體內消化吸收情況差異較大。同時，所用小腸液成分復雜，不同批次的各種酶的活力很難一致，因此不同批次的小腸液用量需經過校正，故試驗結果誤差較大。加拿大學者Sauer等用半離體的活動尼龍袋法測定了一些飼料的能量和粗蛋白消化率，并與傳統的糞分析法結果進行了比較，建立了回歸關系。但是這種半離體方法仍然需要依賴荷術動物，并非真正的離體測試方法。另外該方法因為尼龍袋在動物消化道內的滯留時間差異較大，且難以調控，往往導致實驗的重復性較差。丹麥學者Boisen等和法國學者Jaguelin等提出了先用pH2.0的胃蛋白酶處理，再用胰蛋白酶處理，再用5ml?20％的磺基水楊酸沉淀未被消化的蛋白質，經過濾后，由樣品和未消化殘渣含量計算出粗蛋白的體外消化率。雖然測得的結果異系數很低，但體外法和體內法測得的結果相關性不強。這一方法盡管可以克服采用小腸液酶活不穩定的缺陷，但反應過程仍然是在封閉容器中進行的。

為了克服上述存在的問題，本發明的目的是提供了一種測定飼料蛋白質和氨基酸消化率的體外透析管方法，利用半透膜的透析管替代動物的腸道，用酶替代腸道的消化液對飼料蛋白質和氨基酸消化率的測定，提高了飼料配方的準確性，保證了飼料加工企業生產出優質高效飼料。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案，根據仿生學原理，利用具有半透膜性質的透析管替代動物的腸道，用標準的酶替代腸道的消化液采用如下的適宜條件是：準確稱取1g樣品(精確至0.0001)于三角瓶中，在溫度為25-40℃水浴下，加pH1.5-2.5的胃蛋白酶溶液(濃度為0.0001-0.01g/ml)，水解2-8小時，經中和后轉移至透析管中，再加pH6.5-8.5的胰蛋白酶溶液(濃度為0.00025-0.05g/ml)，然后將透析管置于定量透析液的恒溫反應器中，水解22-26小時，然后定量分析透析液或殘渣中蛋白質和氨基酸含量。依據如下公式計算出飼料蛋白質和氨基酸的體外消化率測定結果，利用相應的回歸預測模型體(表1)，可以方便地預測生長豬體內飼料蛋白質和氨基酸消化率。

??????????????D％=[1-(Nr^*R)/(Nr^*I)]^*100

??????????????或D％=[(Nt^*T)/(Ni^*I)]^*100

符號說明：Ni、Nr和Nt分別表示樣品、消化殘渣和透析液中的營養物質濃度，I、R和T分別表示樣品、殘渣和透析液的重量。

本發明與現有技術相比，具有以下優點和效果，工藝簡便，方法易行，可根據相應的線性回歸模型預測生長豬體內飼料蛋白質和氨基酸消化率。用本方法測定飼料蛋白質和氨基酸的消化率可以擺脫對試驗動物的依賴，縮短試驗周期，特別適宜飼料加工企業在批量評價飼料原料時使用，提高飼料配方的準確性，保證飼料加工企業能穩定生產優質高效飼料，具有廣泛的社會和經濟效益。

實施例：

常用豬飼料(秘魯魚粉、國產魚粉、菜粕、棉粕等)樣品蛋白質和氨基酸消化率的測定。按常規采樣方法取樣，將原料粉碎過1mm分析篩，然后取1g樣品(準確至0.0001)于三角瓶中，加pH值為1.5-2.5的胃蛋白酶溶液(濃度為0.0001-0.01g/m)，在溫度25-40℃水浴下，水解2-8小時，經中和后全量轉移至透析管中。加pH值為6.5-8.5的胰蛋白酶溶液(濃度為0.00025-0.05g/ml)，再水解24小時。然后定量分析透析液或殘渣中蛋白質和氨基酸的含量，即可測定樣品的蛋白質和氨基酸體外消化率(表2)。同時根據相應的線性回歸模型(表1)可以較方便地預測出這些樣品的蛋白質和氨基酸回腸末端消化率(表3)。