[發(fā)明專利]一種新的多肽——人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00111921.4
• 申請日: 2000-03-07
• 公開（公告）號: CN1312277A
• 公開（公告）日: 2001-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

人類染色體的末端都存在一個雙鏈六核苷酸(TTAGGG)組成的重復(fù)序列，稱為端粒。端粒的作用是使細胞識別完整和斷裂的染色體，保護染色體不受核酸酶降解，并且還是染色體復(fù)制的一個必不可少的要素。端粒的缺失會導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)的變異，與細胞癌變和衰老有關(guān)。因此，端粒在各種細胞中都是不可缺少的。【Science.1995?Dec?8；270(5242):1601-7.】

端粒中除DNA外，還含有蛋白，即端粒蛋白，因此是一種核酸蛋白復(fù)合物。端粒蛋白沿著端粒重復(fù)序列排列。在脊椎動物中，這種端粒蛋白稱為端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白(TRF,telomeric?repeat-binding?factor)。TRF與端粒的TTAGGG重復(fù)序列結(jié)合，包含一個Myb型的DNA結(jié)合的重復(fù)序列和一個氨基端的酸性區(qū)域。免疫熒光標(biāo)記試驗表明TRF在人類的間期細胞中與端粒DNA處于同一區(qū)域，在中期位于染色體的末端。

端粒蛋白調(diào)節(jié)著端粒重復(fù)序列的重復(fù)次數(shù)，也就是端粒的長度。當(dāng)端粒蛋白與端粒重復(fù)序列相結(jié)合時，端粒的長度減少，而這種減少又減少了端?？梢耘c端粒蛋白結(jié)合的數(shù)目。正是這種負反饋使得端粒的長度重新維持在一個相對穩(wěn)定的長度上。以上發(fā)現(xiàn)是在酵母的端粒蛋白Raplp中發(fā)現(xiàn)的。由于端粒蛋白的高度保守性，其調(diào)節(jié)端粒長度的功能同樣可以適用于人類以及其他脊椎動物的端粒蛋白?！維cience?275:986-990,1997.】

在細胞周期的調(diào)節(jié)中，端粒蛋白還被證明與細胞的有絲分裂有關(guān)，這是和端粒蛋白的調(diào)節(jié)端粒長度，與癌癥和衰老相關(guān)的功能相一致的?！綪roc?Natl?Acad?SciU?S?A?1997?Dec9；94(25):13618-23】

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株以及未饑餓的L02細胞株中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13。

由于如上所述人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人端粒重復(fù)序列結(jié)合蛋白13異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中162-524位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-2306位的序列。