[發明專利]一種新的多肽——人熱休克蛋白15和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111919.2
• 申請日: 2000-03-07
• 公開（公告）號: CN1312275A
• 公開（公告）日: 2001-09-12
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人熱休克蛋白15，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在一些生物，例如果蠅、酵母和一部分培養的HeLa細胞株中，當環境溫度升高時，會合成一些特殊的蛋白。例如將HeLa細胞株的環境溫度提高到45℃時10分鐘時，至少有三組蛋白質的合成將會提高。【Europ.J.Biochem.117:341-346,1981.】這種合成可以被放線菌素D所抑制，說明合成是受到轉錄調控的。這種蛋白被稱為熱休克蛋白。當細胞受到其他的不利于新陳代謝的環境壓力時，例如輻射、有毒的金屬離子等，也會表達此類蛋白。因此，這種蛋白又被稱為壓力蛋白(stress?protein)。熱休克蛋白對維持細胞的整體性是非常重要的。在人類的基因組中也發現了類似的序列。通過對人的熱休克蛋白HSP70的分析發現，在唐氏綜合癥中(Down?syndrome)，HSP70蛋白的表達增高。有兩個熱休克基因定位于補體系統的其他組成成分，補體活化調節因子中。【Genomics?12:74-79,1992】還有可以HSP70基因位于Ⅲ類主要組織相關性復合物(MHC)的基因區域中，是與MHC相關的。

許多的代謝失衡和機體受傷，例如中風，神經退化癥，癲癇和外傷都會導致熱休克蛋白的表達，其中最大量的是HSP70。超表達HSP70蛋白可以保護細胞不受這類失常的損傷。說明熱休克蛋白的表達是一種細胞的保護機制。【MolecularMedicine?Today,1999,5:12:525-531】

有證據表明HSP70蛋白在許多種癌癥中表達，對預后以及抗藥性有一定的作用。【Onkologie?1999,22:3:236-239】

細胞因子和原癌基因的mRNA在3’非翻譯區的富含AU的部分經常很快的降解。這種降解與結合富含AU序列的結合蛋白AUF1有關。AUF1與熱休克蛋白HSC70和HSP70，翻譯起始因子EIF4G以及poly(A)結合蛋白形成復合物。首先EIF4G同AUF1解離，接著AUF1遍在蛋白化，之后AUF1被蛋白酶體降解。熱休克時產生的HSP70蛋白，泛素-蛋白酶體網絡的負調控，以及便在蛋白化酶E1的失活都會阻礙富含AU的mRNA和AUF1的降解。這些結果將細胞因子mRNA的快速降解與泛素-蛋白酶體途徑結合起來。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv?304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中，本發明的多肽的表達譜與人MHC相關的HSP70蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人熱休克蛋白15。

由于如上所述人熱休克蛋白15蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人熱休克蛋白15蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人熱休克蛋白15蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人熱休克蛋白15以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人熱休克蛋白15的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人熱休克蛋白15的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人熱休克蛋白15的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人熱休克蛋白15的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人熱休克蛋白15的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人熱休克蛋白15異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含:具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。