[發明專利]一種新的多肽——人dyneinsATP酶beta重鏈蛋白16和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111855.2
• 申請日: 2000-03-02
• 公開（公告）號: CN1311238A
• 公開（公告）日: 2001-09-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

Axonemal?dyneins有兩個或三個球狀頭部和一個普通基底及可彎曲性尾部，每一個頭部/尾部有若干個相對分子量＞400,000的單個重鏈肽段單位組成。這條重鏈稱之為β重鏈。從海膽精子鞭毛上分離的β重鏈，在免疫上與胚胎纖毛是一致的[Ogawa,K.et?al.Cell?Motil.Cytoskel.16,58-67(1990)]。有趣的是該β重鏈保留了微管的體內轉運功能。β重鏈通過蛋白質水解可分為A片段和B片段，分別為12S和6S，并且可能與分子頭部和尾部的結構域相對應。Dynein?ATP酶是一種能量轉導酶，它能為微管之間的滑動提供能量，而微管之間的滑動是真核細胞的鞭毛和纖毛擺動的基礎，并且很可能也為其他大分子運動提供能量。

海膽胚胎axonemal?dyneins的β重鏈4466個氨基酸殘基包含有5個ATP結合位點的基元序列。這些ATP結合位點或位于V1位點或位于V1位點附近。β重鏈的整條鏈的二級結構是一個α/β模式。最長的兩個區域α轉角以及7個連續的由120和50個氨基酸殘基組成的水解重復片段，可能是功能結構域，但似乎沒有延伸的盤卷尾部結構域[Foltz,K.Asai,K.J.Cel?Motil.Cytoskel.16,33-46(1990)]。

海膽胚胎axonemal?dyneinsβ重鏈序列最顯著的特征是有5個核甘酸結合位點基元A拷貝，這個核甘酸結合位點是(A/G)XXXXGK(T/S)。主要水解ATP結合位點可能是GPAGTGKT序列(GKT2

)，位于1852-1859，該位點位于N末端下游的660個氨基酸處，離V1位點很近。研究表明，dyneinsβ重鏈ATP結合位點的脯氨酸1853可能位于V1位點的分裂處。而ATP結合位點旁邊的序列與其他已知的細胞骨架單體蛋白不是很相象，特別是可曲性甘氨酸環延伸至GXXXXGKT基元以外的上游區域，并且比大多數ATP結合蛋白更長[Gottesman,S.,Clak,W.P.&Maurizi,M.R.J.biol.Chem.265,7886-7893(1990)]。

第二個GKT核甘酸結合位點基元(GKT1)位于154-161氨基酸殘基，兩個GKS基元位于2133-2140和2460-2467氨基酸殘基。一個修飾GKQ基元則位于2805-2812氨基酸殘基。兩個GKS基元序列GNAGXGKS組成了核甘酸結合位點的一部分，并在生物進化中是保守的，在dyneinsβ重鏈功能方面起重要作用。這些功能作用可能包括對dyneins過橋活動(纖毛和鞭毛擺動所必須)調節，對ATP含量增加的抑制等。

Dyneins?ATP酶β重鏈蛋白可能參與肌肉收縮，變形運動，胞質分裂等細胞活動，并可作為蛋白激酶及癌基因產物的作用底物，參與多核糖體及蛋白合成，細胞膜形態維持等生物反應。

本發明的新的人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16與已知的海膽axonemaldyneins?ATP酶β重鏈蛋白在蛋白水平上有73％的同一性和88％的相似性，兩者同為dyneins?ATP酶β重鏈蛋白家族的成員且具有相似的生理學功能。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

由于如上所述人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人dyneins?ATP酶beta重鏈蛋白16的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。