[發明專利]一種新的多肽——網格蛋白輕鏈21和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111853.6
• 申請日: 2000-03-02
• 公開（公告）號: CN1311195A
• 公開（公告）日: 2001-09-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——網格蛋白輕鏈21，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

細胞攝取物質的內活動機制主要有兩種：吞噬作用(即“細胞吞食”)，通常消化較大顆粒(直徑＞0.5.mu.m)，胞飲作用(“細胞飲用”)，小泡中攝入較小的顆粒(直徑＜0.2.mu.m)。胞飲作用最常發生在細胞膜被稱為網格蛋白-包被的凹洞的特定位點。網格蛋白因其具有三只腳的外形而被稱為三腳蛋白復合體。網格蛋白包被的小泡介導自一個細胞膜到另一個細胞膜的受體選擇性運輸。它們有助于受體介導的內吞作用以及反-高爾基體網絡中的分揀蛋白。在溶液中，網格蛋白三腳蛋白體自我裝配形成被稱為“籠形”的封閉式多面結構。在質膜中，網格蛋白的多面體裝配形成因為吞入源自胞外環境物質而在彎曲部分增加的包被的凹洞。

網格蛋白是一種主要的膜形成蛋白，它把類似包膜凹孔的泡囊裹住，并形成參與整合生物中膜交通的細胞表面碎片。網格蛋白的外膜(被稱為三角蛋白復合體)由三條重鏈(180Kd)及三條輕鏈構成(23至27Kd)。網格蛋白的重鏈為網格提供結構框架，形成三支結構，而輕鏈跨越每一支的內部片段并能夠與其他胞質蛋白相互作用。包被網格蛋白小泡的形成要求三腳蛋白復合體的聚合至位于細胞膜胞質一側的多面體網絡。網格蛋白的裝配通過其與連接物分子作用選擇性誘捕受體，最終在出芽的膜泡周圍形成球狀包被。再出芽之后，網格蛋白解裝配，釋放出小泡去與目標膜融合。在不同細胞內膜上調整網格蛋白的時間以及位點，從細胞內池中補充網格蛋白亞基以及控制網格蛋白解裝配需要多分子信號。網格蛋白的輕鏈介導這些調控機制，它可能有助于正確定向裝配及分解網格蛋白外膜，非共價結合于重鏈，它們還結合鈣并與非包被的ATP酶hsc70相互作用。在較高等的真核生物中，兩種基因編碼不同但相關，同源度為60％的輕鏈：LC(a)及LC(b)。這兩種基因都能通過組織特異性可變剪接而產生兩種不同的形式，兩種形式因分別插入30或18個殘基的序列而不同。網格蛋白輕鏈自N端至C端線性排列6個功能域：磷酸化定向序列；hsc70結合序列；EF-手形鈣結合序列；7肽的重復序列，結構為卷曲螺旋型α螺旋；神經元特異插入序列；具可變半胱氨酸的C-端區域。在網格蛋白輕鏈的N-末端部分有一個在LC(a)及LC(b)完全保守的21個殘基的區域，呈酸性。在酵母中有一條序列與較高等生物的輕鏈只是約略相關的單一輕鏈(基因為CLC1)。我們開發了網格蛋白輕鏈的兩條特征序列膜板。第一條是來自真核生物輕鏈的保守N-末端區域中心的7個氨基酸肽段，所有較高等的真核生物的輕鏈中的保守序列：F-L-A-Q-Q-E-S；第二條衍生自位于所有已知網格蛋白輕鏈C-末端的帶正電區域，所有生物中的保守序列：[KR]-D-x-S-[KR]-[LIVM]-[KR]-x-[LIVM](3)-x-L-K。

含有上述保守肽段的多肽、該多肽的拮抗劑、激動劑、抑制劑，可診斷、預防兼治療與異常小泡運輸有關的失調。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中，本發明的多肽的表達譜與網格蛋白輕鏈13的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為網格蛋白輕鏈21。

由于如上所述網格蛋白輕鏈21蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的網格蛋白輕鏈21蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新網格蛋白輕鏈21蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——網格蛋白輕鏈21以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼網格蛋白輕鏈21的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼網格蛋白輕鏈21的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產網格蛋白輕鏈21的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——網格蛋白輕鏈21的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——網格蛋白輕鏈21的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。