[發明專利]一種新的多肽——人核糖體S6絲氨酸－蘇氨酸蛋白激酶10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111851.X
• 申請日: 2000-03-02
• 公開（公告）號: CN1311314A
• 公開（公告）日: 2001-09-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/48;C12Q1/68;A61K38/45
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

蛋白絲氨酸、蘇氨酸位點的磷酸化是生物體細胞表皮受體接受外界信號，形成第二信使的重要調控機制，也是其它細胞原癌基因轉化的重要反應步驟，而這一磷酸化過程通常由體內的各種絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶來催化完成。生物體內絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶家族的成員分布非常廣泛，它們參與調控各種重要的生理學過程。核糖體S6激酶家族(rsk)中亦存在著一類絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，該類蛋白在生物體內作為細胞信號傳導的中間介導物調控著多種生長調節因子的作用活性。

人們已從爪蟾、人等多種高等生物體內克隆得到了不同來源的核糖體S6激酶家族的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，發現這些蛋白激酶均約為90KDa大，并具有相似的生物學功能。1987年，Erikson等人從爪蟾卵中克隆得到了一核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，該蛋白激酶在胰島素及孕酮刺激的卵突變細胞中起重要的作用，介導核糖體S6蛋白C末端特殊絲氨酸殘基的磷酸化，而磷酸化的核糖體S6蛋白又作為核糖體40S亞單位的重要組成部分，參與構成具有生物活性的核糖體[Erikson?E.,D.Stefanovic?et?al.,1987,Mol.Cell.Biol.,7:3147-3155]；1994年，David等人又從人中克隆得到了一核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，該蛋白激酶在體內存在三個不同的轉錄本，亦參與生物體內各種重要的信號傳導調控過程[David?E.Moller,Chun-hong?Xia?et?al.,1994,Am.J.Physiol.,266:C351-C359]。由此可見，該類蛋白激酶家族的成員均在胚胎組織核糖體的組成及發育過程中起著極為重要的調控作用。

對核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶的功能進行研究發現，該蛋白的作用底物分布非常廣泛，可催化核纖層蛋白C及多種含有R-X-X-S保守磷酸化位點的蛋白的磷酸化過程。該類蛋白激酶的氨基酸序列中均含有兩個保守的ATP結合結構域，其可能是激酶與ATP結合，為催化反應提供所需能量的重要作用位點。該類蛋白激酶在生物體內催化多種不同的生長因子及激素如表皮生長因子、纖維生長因子、血清及胰島素等特殊位點的磷酸化，進而調控各種與之相關的代謝途徑的進行。研究發現，核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶在人的體細胞及生殖細胞中均有表達，其在各種細胞增殖過程中亦起著極為重要的作用，由此可知，該蛋白激酶的表達異常可能與正常人細胞各種相關疾病發生有關。核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶在生物體的生殖細胞發育及體細胞發育過程中均起著重要的作用，該蛋白的突變或表達異常與生物體內各種相關的發育紊亂性疾病、相關組織的腫瘤及癌癥等疾病的發生均密切相關[David?E.Moller,Chun-hong?Xia?et?al.,1994,Am.J.Physiol.,266:C351-C359]。

本發明的新的人蛋白與已知的人核糖體S6激酶在蛋白水平上有51％的同一性和70％的相似性，且與其它核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶相似，其蛋白序列中亦含有兩個保守的ATP結合結構域，因而認為其是一種新的人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，并與該類蛋白激酶家族的其它成員具有相似的生物學功能，命名為人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶10。該蛋白在生物體內參與調控多種重要的信號傳導過程，并參與調控各組織細胞的增殖，其突變或表達異常通常與生物體胚胎發育紊亂性疾病、各種相關組織發育紊亂性疾病及相關組織的腫瘤及癌癥等疾病的發生密切相關。該蛋白還可用于診斷及治療上述各種疾病。

由于如上所述人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶10蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶10以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人核糖體S6絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶10的多核苷酸的重組載體。