[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白51和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111802.1
• 申請日: 2000-03-02
• 公開（公告）號: CN1311207A
• 公開（公告）日: 2001-09-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白51，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鋅指蛋白在生物活細胞中起著各種重要的作用，其中最重要的是作為轉錄調節因子發揮作用[Berg?J.M.,Shi?Y.et?al.,Science,1996,271:1081-1085]。真核基因的轉錄調控對于基因的正常表達是十分重要的，通常由轉錄調控因子來完成這一調控過程。轉錄調控因子在生物體內參與決定基因在何種組織及何種發育階段開始轉錄。編碼這類蛋白的基因如發生突變，不但該基因自身不能正常表達，而且受其調節的許多基因也不能正常的進行轉錄與表達。鋅指蛋白對基因表達的調控主要通過與特定的DNA序列結合來完成，現在發現也有一些鋅指蛋白可與RNA結合以參與調控生物體內一些重要的信號轉導過程。鋅指蛋白在生物體內的分別非常廣泛，按其組成結構上的特征又可分為各種不同的亞家族，不同亞家族的成員在生物體內協同作用，以正確地調節不同基因的轉錄表達及生物體內一些重要的信號轉導途徑的完成。

鋅指蛋白為編碼鋅離子介導的核苷酸結合蛋白多基因家族中的成員，按鋅指蛋白所含鋅指結構的不同，又可將其分為不同的類型，C2H2型鋅指蛋白即為分布最廣的一類，該蛋白家族成員的蛋白序列中均含有28-30個氨基酸長的保守的指重復序列：(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸殘基位點為高度保守的。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個拷貝，其拷貝數不同則功能也不同。鋅指蛋白與不同長度的DNA的結合依賴于指結構的數量，多指結構可能與復合物的結合穩定性有關，而復合物是RNA聚合酶轉錄的作用位點[Jeremy?M.Berg,Annu.Rev.Biophys.Chem,1990,19:405-421]。

鋅指蛋白家族的成員在生物體內的分布非常廣泛，按其結構特征還可分成各種亞家族。C2H2型Kruppel鋅指蛋白在生物體內即形成了獨立的亞家族，該亞家族的成員均含有如上所述的C2H2型鋅指蛋白家族保守的鋅指基序，且各基序間由保守的H/C連接區域連接在一起，該區域含有保守的氨基酸序列：TGEKPY/F[Schuh?R.,Aicher?W.Et?al.,Cell,1986,47:1025-1032]。此外，Bellefroid等人于1991年就指出，該亞家族中約有三分之一的成員在其N末端還含有一由75個氨基酸組成的保守基序，并將此基序命名為KRAB(Kruppel-associated?box)結構域。該結構域為鋅指蛋白N末端與DNA結合的結構域，在進化上高度保守[Judith?F.Margolin?et?al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1994,91:4509-4513]。該結構域被分為A、B兩個盒結構，其中富含變化的氨基酸殘基，形成兩個親水性螺旋。鋅指蛋白KRAB亞家族中的成員有些同時含有KRABA-盒及KRAB?B-盒，而有些僅含KRAB?A-盒。研究發現，KRAB結構域為一潛在的轉錄抑制結構域，其中由45個氨基酸組成的親水性螺旋片段為轉錄抑制所必須的，螺旋結構中氨基酸的替換將減弱蛋白對轉錄的抑制功能，從而導致基因轉錄表達的失調及引發各種發育及惡性紊亂相關的疾病[N.Tommerup?et?al.,Genomics,1995,27:259-264]。同時，KRAB結構域與第一個鋅指結構間也含有一保守的連接區域，該區域至少含有一個核酸定位信號，該信號與蛋白的正確定位及發揮功能有關。

人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種不同的鋅指蛋白。1991年，Bellegroid等人從鼠及爪蟾體內克隆得到了兩個KRAB型鋅指蛋白；1993年，Bellegroid等人又從人體內克隆得到KRAB型鋅指蛋白亞家族的另一個成員ZNF91，該蛋白在人的各種組織中均有表達，而在人的T淋巴細胞中表達量顯著增加[Bellefroid?EJ,Marine?JC?et?al.,1993,EMBO?J,12:1363-1374]。上述這些蛋白在體內各種組織中參與調控多種基因的轉錄與表達，其突變或表達異常通常與生物體內各種相關組織的腫瘤及癌癥、血液系統疾病、發育紊亂性疾病等疾病的發生均密切相關。另外，它們在在脊髓發育、分化等過程中亦起著重要的調節作用[Bellefroid?EJ,Poncelet?DA?et?al.,1991,Prog?Natl?Acad?SciUSA,88:3608-3612]。