[發明專利]一種新的多肽——人液泡質子－腺苷三磷酸酶C亞基12和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111752.1
• 申請日: 2000-02-29
• 公開（公告）號: CN1311319A
• 公開（公告）日: 2001-09-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 復旦大學;上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/42;C12Q1/68;A61K38/46
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

已知，人氫離子-腺苷三磷酸酶能將離子/質子“泵入”細胞內的細胞器中或使離子/質子跨越某些細胞(如：破骨細胞、腎間質細胞)的質膜。人氫離子-腺苷三磷酸酶的催化部位是由3個A亞基和3個B亞基構成的六聚體，具有結合和水解ATP的作用；而另有3個亞基C、D、和E具有調節作用。人氫離子-腺苷三磷酸酶的主要功能是在細胞內調節局部區域的酸堿度，在受體介導的胞飲作用、胞內膜流、蛋白降解及偶聯轉運中起重要作用。故人氫離子-腺苷三磷酸酶具有腎臟酸化作用、骨重吸收作用和穩定細胞內pH值等作用。可見，人V-ATPaseC亞基作為3個調節亞基之一，具有調節人氫離子-腺苷三磷酸酶活性在作用。

重組的人V-ATPase?C亞基蛋白或多肽有多方面的用途。這些用途包括(但不限于)直接做為藥物治療V-ATPase?C亞基功能低下或喪失所致的疾病和用于篩選促進或對抗V-ATPase?C亞基功能的抗體，多肽或其它配體。例如，抗體可用于激活或抑制V-ATPase?C亞基的功能。用表達的重組V-ATPase?C亞基蛋白篩選多肽庫可用于尋找有治療價值的能抑制或刺激V-ATPase?C亞基功能的多肽分子。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株以及前列腺組織中，本發明的多肽的表達譜與人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基42的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12。

由于如上所述人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人液泡質子-腺苷三磷酸酶C亞基12異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中935-1255位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1980位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。