[發(fā)明專利]一種新的人巨糖蛋白相關蛋白及其編碼序列

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00111694.0
• 申請日: 2000-02-17
• 公開（公告）號: CN1267729A
• 公開（公告）日: 2000-09-27
• 發(fā)明（設計）人: 李能干;錢斌治;彭永德;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛

本發(fā)明涉及分子生物學、生理學、酶學以及基因工程領域。具體地，本發(fā)明涉及一種在人類腎上腺中表達的hGP蛋白及其核酸序列。本發(fā)明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

巨糖蛋白(large?glycoprotein，G1)是多種病毒生命活動不可或缺的蛋白之一。加州腦炎病毒(California?encephalitis?virus)感染蚊子與哺乳動物細胞的體外試驗以及經口傳染蚊子的試驗均被證實G1蛋白在這些過程中必不可少。(Virology?1995?Feb?1；206(2)：945-53)。在鼠中，G1基因定位于兩個可能的腫瘤抑制因子基因旁邊，而且其序列不論在鼠中還是人中都非常保守，表明這段序列可能有重要的生理意義。(Genomics?1997?Dec?15；46(3)：483-6)。G1相關基因的表達產物GP蛋白(G1-related?protein，GP)，參與了多種免疫信號途徑。(JImmunol?1995?Oct?1；155(7)：3385-400)

本發(fā)明中，我們在人類腎上腺中克隆到家鼠GP基因的同源基因。在本發(fā)明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hGP蛋白序列及其核酸序列。

本發(fā)明的第一目的就是提供一種新的人基因hGP(Genbank?AccessionNo.AF155650)，該基因是一個人hGP蛋白基因。

本發(fā)明的第二目的是提供一種新的人蛋白hGP。

本發(fā)明的第三目的是提供一種利用重組技術生產上述的新的人hGP蛋白和核酸序列的方法。

本發(fā)明還提供了這種人hGP蛋白多肽和編碼序列的應用。

在本發(fā)明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hGP蛋白質活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第35-855位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第35-855位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第35-855位的核苷酸序列。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種分離出的人hGP蛋白質多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.7序列的多肽。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞。在一個實例中該宿主細胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細胞是真核細胞。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種產生具有人hGP蛋白質活性的多肽的方法，該方法步驟如下：

(1)將編碼具有人hGP蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成人hGP蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.6中從核苷酸第35-855位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞，形成人hGP蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達人hGP蛋白多肽的條件下，培養(yǎng)步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有人hGP蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.6中第35-855位的序列。

本發(fā)明還提供了與hGP蛋白多肽特異性結合的抗體。

在本發(fā)明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態(tài)下位于其兩側的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經與天然狀態(tài)下伴隨核酸的組份分開，而且已經與在細胞中伴隨其的蛋白質分開。