[發明專利]一種新的多肽——人還原劑與衣霉素應答蛋白40和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111517.0
• 申請日: 2000-01-26
• 公開（公告）號: CN1307021A
• 公開（公告）日: 2001-08-08
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人還原劑與衣霉素應答蛋白40，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

高胱氨酸過量是引起動脈硬化和血栓的一個危險因子。高胱氨酸會引起內皮細胞的損傷或機能不良，從而引發動脈硬化和血栓。在用高胱氨酸刺激人臍帶動脈血管內皮細胞時，可以觀察到某些基因表達發生了變化。有一些基因呈正調控，另一些呈負調控。一種正調控基因是GRP78/BiP，這是一種位于內質網的分子伴娘。這意味著高胱氨酸引起的氧化還原電位的變化會引起內質網中未折疊的蛋白的聚集。另一種正調控基因編碼一種雙功能酶，與高胱氨酸的代謝有關。第三種正調控基因編碼一種活化轉錄因子4。【Methods?1998?Dec；16(4):434-43】

還原劑與衣霉素應答蛋白(reducing?agent?and?tunicamycin-responsiveprotein,RTP)也是一種在高胱氨酸刺激時起正調控作用的蛋白。Northern雜交發現RTP?mRNA不但在高胱氨酸刺激的臍帶動脈血管內皮細胞中表達，而且用巰基乙醇和衣霉素刺激時也會產生RTP?mRNA。現在已經知道巰基乙醇和衣霉素都會引起內質網的收縮。RTP?mRNA不僅在人成熟器官中廣泛表達，在鼠類的胚胎發育中也受到調控。【Methods?1998?Dec；16(4):434-43】這一結構顯示了RTP蛋白在動脈粥樣硬化中的作用。

在對RTP在胎盤中表達的研究發現，RTP?mRNA在合胞體滋養層中表達量最高。在BeWo細胞中RTP基因的表達是蛋白激酶C依賴的。這一結果表明RTP可能在滋養層細胞的增殖和分化中起一定作用?！綛iol?Reprod?1999?Sep；61(3):681-6】

本發明的多肽在蛋白水平上與在人中發現的RTP蛋白有65％的同源性。因此是一種新的RTP蛋白，并推定有相似的生物學功能。本發明命名為人還原劑與衣霉素應答蛋白XX。

由于如上所述人還原劑與衣霉素應答蛋白40蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人還原劑與衣霉素應答蛋白40蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人還原劑與衣霉素應答蛋白40蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人還原劑與衣霉素應答蛋白40以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人還原劑與衣霉素應答蛋白40的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人還原劑與衣霉素應答蛋白40的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人還原劑與衣霉素應答蛋白40的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人還原劑與衣霉素應答蛋白40的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人還原劑與衣霉素應答蛋白40的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人還原劑與衣霉素應答蛋白40異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中84-1175位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-2588位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。