[發明專利]一種新的多肽——網格蛋白76和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111507.3
• 申請日: 2000-01-26
• 公開（公告）號: CN1306976A
• 公開（公告）日: 2001-08-08
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——網格蛋白76，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

細胞攝取物質的內活動機制主要有兩種：吞噬作用(即“細胞吞食”)，通常消化較大顆粒(直徑＞0.5.mu.m)，胞飲作用(“細胞飲用”)，小泡中攝入較小的顆粒(直徑＜0.2.mu.m)。胞飲作用最常發生在細胞膜被稱為網格蛋白-包被的凹洞的特定位點。網格蛋白因其具有三只腳的外形而被稱為三腳蛋白復合體。網格蛋白包被的小泡介導自一個細胞膜到另一個細胞膜的受體選擇性運輸。它們有助于受體介導的內吞作用以及反-高爾基體網絡中的分揀蛋白。網格蛋白是一種主要的膜形成蛋白，它把類似包膜凹孔的泡囊裹住，并形成參與整合生物中膜交通的細胞表面碎片。網格蛋白的外膜(被稱為三角蛋白復合體)由三條重鏈(180Kd)及三條輕鏈構成(23至27Kd)。網格蛋白的重鏈為網格提供結構框架，形成三支結構，而輕鏈跨越每一支的內部片段并能夠與其他胞質蛋白相互作用。包被網格蛋白小泡的形成要求三腳蛋白復合體的聚合至位于細胞膜胞質一側的多面體網絡。網格蛋白的裝配通過其與連接物分子作用選擇性誘捕受體，最終在出芽的膜泡周圍形成球狀包被。再出芽之后，網格蛋白解裝配，釋放出小泡去與目標膜融合。在不同細胞內膜上調整網格蛋白的時間以及位點，從細胞內池中補充網格蛋白亞基以及控制網格蛋白解裝配需要多分子信號。

網格蛋白重復序列是位于網格蛋白重鏈手臂區域的七個折疊的重復序列，每個重復序列約含140個氨基酸，結構為α螺旋，在整個網格蛋白中位于中心部分。該重復序列在哺乳動物中極為保守，它在網格蛋白三聚體的頂角形成球形突出，維持三角蛋白復合體形狀，介導聚化。

Rap磷酸酶是一種蛋白天冬氨酸磷酸酶(AspPc)家族，這種蛋白把磷酸化合物的sPOoF-P中間體去磷酸化，從而防止孢子形成。該家族成員由TPRs?TPR組裝而成。它們是由與孢子形成對立的生理過程所誘導的調節因子。RapA磷酸酶活性由一種小蛋白，PhrA控制。

本發明的多肽含有保守的網格蛋白重復序列以及類RapA蛋白天冬氨酸磷酸酶(AspPc)的保守特征序列，該多肽及其拮抗劑激動劑抑制劑，可診斷預防兼治療與異常小泡運輸有關的失調。

由于如上所述網格蛋白76蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的網格蛋白76蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新網格蛋白76蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——網格蛋白76以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼網格蛋白76的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼網格蛋白76的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產網格蛋白76的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——網格蛋白76的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——網格蛋白76的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與網格蛋白76異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中251-2326位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-2658位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。