[發明專利]一種新的多肽——TBC區域32和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111501.4
• 申請日: 2000-01-26
• 公開（公告）號: CN1306972A
• 公開（公告）日: 2001-08-08
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--TBC區域32，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

細胞的增殖是通過細胞周期而實現的，在正常生物體內，細胞周期的運轉是十分有序的，它是基因有序表達的結果，此種秩序是靠與細胞分裂有關的基因cdc(celldivision?cycle)基因以及增殖相關基因的嚴格監視和調控來保證的，另外還涉及生長因子及其受體、癌基因及抑癌基因、細胞信使系統等諸多因素。TBC區域存在于細胞周期調節因子cdc16中，在許多組織的細胞周期活動和細胞分化過程中起重要作用，尤其在造血細胞、睪丸、腎臟中表達水平最高。通常，TBC區域的表達往往是細胞特異性的或階段特異性的。另外，在致癌基因tre-2中也發現有TBC區域存在。

在TBC區域家族中，都存在有若干個保守的Tyr殘基，如果將這些Tyr殘基磷酸化，這個區域的功能就喪失了。TBC區域的N-末端延伸有一段Cys和His殘基組成的序列，可形成鋅指結構，其C-末端有一系列均勻分布的Leu殘基，可形成亮氨酸拉鏈結構。此外，該蛋白含有許多酸性殘基，大約占整個氨基酸數的12％。我們還發現，在Tyr殘基周圍的氨基酸非常相似：Asp-Val-Pro-Tyr-Lys-Glu-Leu-Leu和Glu-Val-Gly-Tyr-Cys-Gln-Gly-Leu，其中第一個和第六個都是酸性殘基，第二個和最后一個都是Val和Leu殘基，這些位點是與另外一種細胞分裂相關基因cdc7反應的活性位點。根據基因上位分析，在有絲分裂階段，cdc16的TBC區域能夠與其它蛋白，包括cdc11、cdc14、cdc15以及具有蛋白激酶活性的cdc7相互影響、相互作用，從而調節細胞的有絲分裂和胞質分裂過程，并且間接影響到細胞的增殖和分化。

本發明的多肽具有TBC區域的基本結構特征，屬于TBC家族。在體內，它能夠協同其它的cdc基因與癌基因、抑癌基因以及增殖相關基因相互作用，調節細胞周期按照有序的方式正常進行，并且影響細胞的信號傳遞。其調節功能的失控，可導致細胞周期的紊亂，甚至發生細胞的癌化和死亡。

由于如上所述TBC區域32蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的TBC區域32蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新TBC區域32蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--TBC區域32以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼TBC區域32的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼TBC區域32的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產TBC區域32的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--TBC區域32的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--TBC區域32的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與TBC區域32異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SFQ?ID?NO:1中110-991位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1135位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。