[發明專利]同步快速測定多項免疫指標技術

無效

• 申請號: 00109912.4
• 申請日: 2000-07-12
• 公開（公告）號: CN1283794A
• 公開（公告）日: 2001-02-14
• 發明（設計）人: 李毓琦;李明遠;何俊;龔其美
• 申請（專利權）人: 華西醫科大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/536;G01N33/544
• 代理公司: 華西醫科大學專利事務所
• 代理人: 馬碧娜

本發明系免疫分析技術的一種，它應用酶聯免疫分析的原理，采用新的材料和方法，能同步快速地測定多項目的免疫指標，利用該項技術制成的不同試劑盒適用于各種免疫分析領域。

免疫分析技術，目前應用最為廣泛的是放射免疫法(RIA，1956，yalow)和酶聯免疫吸附法(ELISA，1971，Engvall)，后者無放射性污染且成本較低，目前應用最為廣泛。過去ELISA法采用“二步測定法”，方法靈敏，結果準確可靠，但檢測時間較長及步驟較繁，往往患者當日不能得到檢驗結果。近年來，改用“一步測定法”以簡化操作步驟和縮短檢驗時間，雖已取得一定成效，但據權威人士評價，此法對濃度過高或過低的被測物質不易檢出，同時易造成假陰性(中華醫學檢驗雜志，1993，16：351；標記免疫分析與臨床雜志，1994，1：117)。加之ELISA法所用的抗體或抗原的包被板(常稱酶標板)系惰性高分子材料，抗體或抗原包被時僅靠物理吸附，其結合牢固程度差，放置時間超過6個月或受外界條件影響，抗體(或抗原)即自動解吸，該板在啟封后1個月內必須使用完畢，否則失效。此外，ELISA法的包被板為分散型，即單項目多人份測定，最后綜合報告患者的各項檢驗結果，無法多指標同步測定，按人自動處理結果，也無法讓患者進行自查。

本發明旨在應用酶聯免疫分析原理，使用蠶絲綢作為生物活性物質的載體材料，應用微波輻射(MW)加速免疫反應與顯色反應，利用反射式光纖傳導技術，使原來數十分鐘單項完成的免疫檢測，能在數分鐘之內多項指標同步完成。

本發明的技術方案如下：

1．抗體或抗原膜的制備及組裝(可批量生產)

采用具有化學活性基團(-OH，-NH₂)的蠶絲綢膜，以溴化氰活化，然后再與具有-NH₂基的抗體、抗原、受體、及其它蛋白等偶聯，形成抗體或抗原膜，將不同的抗體或抗原膜組裝在同一測試片上(參見實施例示意圖)，存放于試劑盒內以進行檢測(見技術方案2、3、4、5)。

其原理如下：

2．免疫復合物膜的形成(檢測第一步)原理如下：

3．免疫夾心膜的形成(檢測第二步)

原理如下：

4．顯色夾心膜上的標記酶E*將催化下列反應：顯色劑A+顯色劑蘭色互變復合物(吸附于載體絲膜上)

5．結果測定：①儀器測定：用反射式光纖免疫測量儀

②目測：與標準色列比較

本發明與常規的酶聯免疫吸附法(ELISA)比較其優點如下：

(1)反應時間短：反應時間僅為市售ELISA一步法試劑盒反應時間的1/8，因本法應用微波輻射代替ELISA法恒溫孵育。

(2)能批量處理樣本，可單項目多人份測定，亦可1人份多項目同步測定，這樣不僅避免了不同患者血清的相互干擾，且可用儀器自動按人檢測、記錄、打印結果，以縮短檢測周期，避免人為抄錄報告的差錯。

(3)抗體(或抗原)膜用化學修飾方法制備(以溴化氰活化法修飾抗體或抗原于絲膜上)，它與ELISA采用的物理吸附法(包被)比較，其抗體(或抗原)結合率高2～3倍，且穩定性好，活性保存期長達數年。

(4)抗體(或抗原)膜可工業化批量生產，成本低廉。

(5)固態膜上顯色結果可直接用反射式光纖免疫測量儀同步測定，由于光纖傳導抗F擾力強，故該儀器較ELISA檢測所用的酶標光度儀靈敏度高。

(6)固態膜上顯示的測定結果，可直接作為實物資料長期保存。

(7)制成試劑盒附帶的試劑品種比ELISA法現行試劑盒大大減少。

(8)本法可直接測定全血樣本，對于普查更為方便。

本發明的技術特點是：

①首次使用蠶絲綢膜作為生物活性物質載體膜(ELISA法使用的是聚苯乙烯板)；

②檢測中首次應用微波幅射加速免疫反應及酶促顯色反應(ELISA法用恒溫孵育)；

③首次應用自行設計與研制的反射式光纖免疫測量儀測定結果(ELISA法用酶標光度儀)；

④利用上述三項技術能快速、同步測定多項免疫指標。

本發明的技術特點目前尚未見國內外文獻報道

本發明同步快速測定多項免疫指標技術及其利用該技術制成的試劑盒能同步測定多項免疫指標，并縮短檢測時間；同時避免假陰性結果出現；使用方便，并能應用微機全自動處理檢測結果。它不僅適用于醫藥、衛生、食品、環保等單位分析檢測使用，同時亦適于患者個人及家庭自查使用。

實施例：