[發(fā)明專利]反基因V－erbB寡核苷酸及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00109023.2
• 申請日: 2000-06-01
• 公開（公告）號: CN1326938A
• 公開（公告）日: 2001-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮寶章
• 申請（專利權(quán)）人: 馮寶章
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;A61K31/7088;A61K38/16;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

本發(fā)明涉及反基因V-erbB寡核苷酸，其多肽產(chǎn)物，包含其的藥物組合物及其在診斷和治療骨髓增生異常綜合征、白血病和其他多種腫瘤中的應(yīng)用。

基因治療是近十多年來發(fā)展起來的疾病治療新技術(shù)，它是通過糾正致病基因的異常或用新的基因進(jìn)行替換的辦法達(dá)到治療疾病的目的。鑒于目前腫瘤治療手段的局限性和不徹底性，乃至多數(shù)腫瘤患者治療后若干年便復(fù)發(fā)和死亡，人們對腫瘤的基因治療抱有很高的期望。然而現(xiàn)有技術(shù)中用病毒載體將正常基因?qū)塍w內(nèi)的方法，雖有某些療效，但面臨一系列難題。而用反義寡核苷酸硫代磷酸酯作基因治療則避免了因使用病毒載體而帶來的一系列問題。硫代磷酸所帶來的某些毒性是人體可接受和能克服的，因而十分安全。然而，由于反義寡核苷酸是針對癌細(xì)胞靶基因的mRNA而設(shè)計(jì)的，而癌細(xì)胞能源源不斷地從細(xì)胞核內(nèi)產(chǎn)生mRNA，因而不可能有鞏固的療效。而在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的反基因寡核苷酸則針對癌基因的特定的突變位置而設(shè)計(jì)，使之進(jìn)入細(xì)胞后能在細(xì)胞核內(nèi)形成鞏固的DNA三鏈結(jié)構(gòu)而抑制該基因的表達(dá)和擴(kuò)增，從而為腫瘤基因治療帶來新的希望。

骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic?syndrome，MDS)俗稱白血病前期(preleukemia)，是一組惡性的骨髓造血干細(xì)胞病，多數(shù)病人骨髓增生過度但分化成熟障礙，因而其外周血中有形成分減少，出現(xiàn)貧血、出血、血細(xì)胞減少及頭暈、乏力等癥狀。多數(shù)病人診斷后若干月或若干年發(fā)展為急性白血病，且無有效治療方法。

已知V-erbB和V-erbA為雞原始紅細(xì)胞增多癥(AvianErythroblastosis)病毒癌基因。前者同源于表皮生長因子受體(EGFR)基因，具有轉(zhuǎn)化紅系祖細(xì)胞的功能；后者具有阻斷上述紅系祖細(xì)胞分化成熟的作用。二者協(xié)同作用導(dǎo)致雞原始紅細(xì)胞增多癥或稱紅白血病。

骨髓增生異常綜合征(MDS)具有五個(gè)不同亞型，其中難治性貧血(Refractory?Anemia，RA)是其基本型。它可以轉(zhuǎn)化為原始粒細(xì)胞增多RA(即RAEB)和轉(zhuǎn)化中的RAEB(即RAEBT)和急性白血病(Acute?Leukemia，AL)。RAEBT患者骨髓中原始和早幼紅細(xì)胞增多時(shí)還可以再診斷為紅白血病而與上述雞紅白血病相同。RA患者骨髓單一紅系統(tǒng)過度增生時(shí)亦可診斷為紅血病。而紅血病可以發(fā)展為紅白血病。說明紅血病—紅白血病與MDS—RA和RAEB、RAEBT等并無本質(zhì)區(qū)別。提示V—erbB和V—erbA之血細(xì)胞副本C—erbB和C—erbA異常可能在人MDS、白血病發(fā)病中起重要作用。

以往的研究業(yè)已證明，人外周血淋巴細(xì)胞染色體脆性部位(Fragile?Site，F(xiàn)S)高表達(dá)提示腫瘤易感性。腫瘤患者FS往往與腫瘤細(xì)胞染色體斷點(diǎn)以及癌基因位置相同或相近。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一例白血病前期患者外周淋巴細(xì)胞表達(dá)Fra(7)(P¹¹)和Fra(3)(P¹⁴)等。Fra(7)(P¹¹)與C—erbB相毗鄰，患者骨髓紅系病態(tài)造血(Myelodysplasia)明顯，因而高度懷疑C—erbB受累。于是，本發(fā)明人選用V—erbB和V—erbA作探針進(jìn)行Southetn印跡雜交，證明MDS與C—erbB重排/擴(kuò)增和C—erbA缺失/失活相關(guān)，雜交結(jié)果有診斷和治療意義。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人應(yīng)用V—erbB?PCR和正基因寡核苷酸原位雜交方法，進(jìn)而確定C-erbB重排位置，其PCR產(chǎn)物和原位雜交結(jié)果均有診斷和發(fā)病學(xué)意義。由此完成本發(fā)明。

因此，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供應(yīng)用反基因技術(shù)原理用于治療MDS、白血病和其他多種腫瘤的反基因寡核苷酸及其較短的副本。所述的反基因寡核苷酸是針對V-erbB?DNA序列中可疑的重排位置即原位雜交中所用正基因寡核苷酸而設(shè)計(jì)合成的反基因寡核苷酸。

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種藥物組合物，其包括本發(fā)明的寡核苷酸及一種藥物學(xué)可接受的載體，用于治療MDS、白血病和其他多種腫瘤。

本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種反基因寡核苷酸組合(配方)，其包括本發(fā)明的寡核苷酸和與癌癥發(fā)病相關(guān)基因的反基因寡核苷酸。

本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供與所述反基因寡核苷酸相對應(yīng)的正基因寡核苷酸，其能用于診斷MDS、白血病和其他多種腫瘤。

本發(fā)明的第五個(gè)目的在于由本發(fā)明的反基因或正基因寡核苷酸轉(zhuǎn)錄得到的mRNA，及所述mRNA表達(dá)的多肽，包含該多肽的疫苗。

具體地說，首先本發(fā)明涉及反基因V-erbB寡核苷酸，其能用于治療MDS、白血病和其他多種腫瘤。所述的寡核苷酸具有如下核苷酸序列：