[發(fā)明專利]一種O－唾液酸糖蛋白酶樣蛋白及編碼它的多核苷酸序列

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00106834.2
• 申請(qǐng)日: 2000-04-19
• 公開（公告）號(hào): CN1318550A
• 公開（公告）日: 2001-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海生元基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 陳文平

本發(fā)明公開了分離的O-唾液酸糖蛋白酶樣蛋白(以下簡(jiǎn)稱為OSGPLP)基因的多核苷酸序列及其編碼的多肽，以及制備這種多肽的方法。本發(fā)明也公開了將這種多肽用于多種疾病，如惡性腫瘤、血液病、免疫性疾病和各類炎癥等的治療方法。此外，本發(fā)明還公開了通過(guò)鑒別OSGPLP的核酸序列中的突變和OSGPLP水平改變，檢測(cè)與該基因的核酸及其編碼多肽異常有關(guān)的疾病的診斷方法。本發(fā)明還公開了利用本發(fā)明多肽篩選該多肽的拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制物的方法，以及制備針對(duì)本發(fā)明多肽的抗體的方法，也公開了利用本發(fā)明基因的多核苷酸序列和多肽及其拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制物和抗體治療與該基因異常有關(guān)的疾病的用途和用于制備用于上述治療的藥物組合物的用途。

O-唾液酸糖蛋白酶被認(rèn)為是一種特異性水解蛋白質(zhì)，它可水解肽鏈上絲氨酸、蘇氨酸殘基連有唾液酸多糖的蛋白質(zhì)。K.M.Abdullah等人首次從溶血性巴斯德菌血清型A1中得到gcp基因，其轉(zhuǎn)譯蛋白命名為糖蛋白酶或者O-唾液酸糖蛋白內(nèi)肽酶(E.C.3.4.24.57)。(Alan?Mellors等人，1995，酶學(xué)方法(Methods.Enzymol.)248；728-740)。O-唾液酸糖蛋白酶是一種金屬蛋白酶。高濃度的EDTA使其失去活性，經(jīng)透析后，酶又恢復(fù)活性。推測(cè)金屬離子可與酶緊密結(jié)合(K.M.Abdullah等人，1992，感染與免疫(Infect.Immun.),60:56)。

O-唾液酸糖蛋白內(nèi)肽酶作用底物一般是細(xì)胞表面的糖蛋白，如人紅細(xì)胞血型糖蛋白A、CD34(骨髓生血干細(xì)胞表面抗原)、CD43(leukosialin)、CD44(透明質(zhì)酸受體)、CD45(白細(xì)胞普通抗原)、血小板選擇素(P-selectin)反受體、白細(xì)胞介素7受體、epitectin(人腫瘤細(xì)胞表面抗原)等，通常這類底物細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域絲氨酸/蘇氨酸含量約30％。此類糖蛋白既含有O-多糖，又含有N-多糖，但是O-唾液酸糖蛋白酶只專一水解O-多糖(即：唾液酸)蛋白(Sutherland?DR等人，1992年3月1日，免疫學(xué)雜志(J.Immunol.),148(5):1458-64)。Clostridium?perfringens唾液酸苷酶去除血型糖蛋白A的唾液酸，則破壞糖蛋白對(duì)O-唾液酸糖蛋白酶的易感性。推測(cè)此酶需要鄰近的唾液酸殘基結(jié)合來(lái)完成水解肽鏈骨架的工作。(K.M.Abdullah等人，1992，感染與免疫，60,56)。

如上所述O-唾液酸糖蛋白酶在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、胚胎發(fā)育、免疫反應(yīng)等機(jī)體重要功能中起重要作用，相信這種調(diào)節(jié)過(guò)程中會(huì)涉及大量這類蛋白質(zhì)。因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多種類的參與這些過(guò)程的O-唾液酸糖蛋白酶，特別是鑒定這些O-唾液酸糖蛋白酶的氨基酸序列。本發(fā)明提供了一種新的O-唾液酸糖蛋白酶樣蛋白(以下簡(jiǎn)稱為OSGPLP)及其編碼基因，為確定進(jìn)一步明確該類蛋白質(zhì)在健康和疾病狀態(tài)下作用的提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。可用于其相關(guān)疾病的診斷和治療。

本發(fā)明的目的就是提供一種新的O-唾液酸糖蛋白酶樣蛋白及編碼它的多核苷酸。本發(fā)明的多肽具有O-唾液酸糖蛋白酶樣蛋白基因的特征結(jié)構(gòu)域，因而推斷本發(fā)明的OSGPLP是一種新的這類蛋白質(zhì)。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

特別地，所述多核苷酸序列選自：(a)具有SEQ?ID?NO:1中110-1354位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-2058位的序列

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制本發(fā)明多肽活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。